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行为学具体标准操作方法及注意事项

行为学具体标准操作方法及注意事项一、慢性社会挫败应激模型(Chronic social defeated stress):选取一定数量的CD1小鼠作为攻击性小鼠,在正式实验前2-3周开始对其攻击性进行蹄选。具体方法:将CD1雄鼠单独饲养一段时间,让其产生领地意识;也有文献报道采用雌雄CD1同笼喂养来产生领地意识的[1],但这样做用一个弊端,雌性CD1小鼠会怀孕。1周以后,随机放入一只陌生C57的小鼠作为领地入侵者,计时,记录CD1雄小鼠第一次对C57小鼠发动攻击的时间,并记录180s内CD1攻击C57的次数;也有文献以CD1雄性小鼠在1min之内对C57小鼠发动攻击视为攻击性CD1小鼠[1、2]。连续筛选三天,以三天均有攻击C57小鼠为准,原则上CD1小鼠在60s内发起攻击,且在180s内攻击次数大于2次及以上。将CD1转移到大的笼子内时,要注意统一将CD1小鼠放至左侧,并保证大笼中的隔板固定,以防止CD1跑到右侧来。正式实验前,选取雄性C57小鼠(7周),打耳标,分笼,给予正常饮食饮水一周充分适应环境,根据糖水偏好实验,旷场实验,交互实验和强迫游泳测试等的结果,将C57小鼠分为对照组和挫败组。当实验开始时,提前分离CD1雌鼠,取挫败组C57小鼠一只,直接放入陌生CD1雄性小鼠(8-9周)饲养笼中,使C57小鼠遭受雄性CD1小鼠持续性攻击约5-10min。然后将两只小鼠用带有密集小孔的透明塑料隔板隔开,使两只小鼠彼此仍能互视和闻嗅但是无法接触,运用这种方法持续到下次进行攻击前为止,完成该过程后即为第一天应激。第二天再将该C57鼠放入另一不同的CD1雄性鼠的笼中,使C57小鼠受到相同程度的应激;第三天再放入到第三只CD1雄性鼠的笼中,同样使C57小鼠受到同样程度的应激。如此连续应激10天,并保证每天同一只C57小鼠受到不同CD1雄性鼠的攻击。在此期间,对照组和挫败组C57小鼠均维持正常饮食饮水,而对照组则保持2只一笼,每天相互更换接触不同的小鼠[2]。10天连续应激结束后即开始行为学测试。最初的社会挫败模型是由Tornatzky和Miczek于1993 年在大鼠中建立的。模型建立过程如下:选取一批月龄、体重均较大的雄性啮齿动物为居住者,即攻击者,使其能在斗争中占主导地位。因体重和月龄的差异,二者存在从属关系,居住者会对入侵者进行攻击,当入侵者出现顺从、投降姿势、发出痛苦的叫声时,直到攻击过程结束[3]。然后将入侵者放入带孔、透明的保护笼中,再置于居住者笼中,此过程允许存在嗅觉、视觉、触觉接触,但无直接接触。而上述两攻击鼠对实验鼠攻击的两个过程进行的时间随着实验方式及实验动物的改变而进行调整。与其他应激一样,社会挫败同样能引起动物长期的行为学改变。当进行2-4d连续的社会挫败应激,大鼠自发活动和探索行为显著性降低[4-5],攻击性和性需求减弱,更易于屈服和焦虑[6]。而且,如果进行更多天数的社会挫败,会导致一系列的抑郁相关行为改变[7]。二、糖水偏好实验(Sucrose intake test):1%糖水和清水适应三天,一天半的时候将糖水和清水互换位置,以防C57小鼠产生位置差异。禁食禁水一天,并提前配制好1%糖水和清水。测糖水和清水的初质量,并给C57小鼠上糖水、清水和鼠粮。24小时后,测量糖水和清水的剩质量,计算出糖水消耗量A(g)和清水消耗量B(g),利用公式A/(A+B)*100%,即得到糖水偏好率。注意事项:1、测量时一定要将瓶表面残留的水擦干净,为了测量,应在糖水实验前一天准备好糖水和清水,并将瓶分开放,以便瓶表面的水份蒸发。2、给小鼠上糖水喝清水时,应注意动作要轻要慢,尽可能地减少误差,避免糖水和清水漏出。糖水偏好测试是检测抑郁症快感缺失的经典方法。另有文献测试前采用每12h将糖水和白水互换位置的方式来防止C57模型鼠产生位置偏好,消耗量采用1h来计算糖水偏好率[1],也有采用2小时的[8]。此外也有同时采用2瓶饮用水,供其选择性饮用,适应2d后,再换成2 瓶1%的蔗糖溶液,同样再选择性地适应2d的方式[9]。糖水摄入量或偏好指数的降低表示动物出现快感缺乏状态,糖水偏好率的值与动物的快感程度呈正相关,其值越小则表明动物快感缺失越严重。三、旷场实验(Open field test):实验在安静的环境下进行,将小鼠置于(44*44cm)的旷场中心处。同时进行摄影(5分半)和计时,前30s为小鼠适应阶段,后5分钟记录小鼠的站立次数、排便颗粒数、梳毛次数(双前脚梳毛为准),并收集每只小鼠的大便,放至冰块处保存(若没有大便,采用人工按压腹部的方法)。测完一只后,用酒精清洗旷场箱的内壁及底面,以免上次动物余留的信息(大小便、气味等)影响下次的测试。 注意事项:1、若小鼠数量较多,可考虑同时用两个或四个箱子。2、最终要分析5min

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