合浦珠母贝C型凝集素2的序列特征和表达分析.docVIP

合浦珠母贝C型凝集素2的序列特征和表达分析 　　摘要：构建了合浦珠母贝的ｃＤＮＡ文库，并通过ＥＳＴ序列筛选和重新测序获得了一个新的Ｃ型凝集素基因的ｃＤＮＡ序列，命名为ＰｏＬＥＣ２，其长度为１ ６５９ ｂｐ，５端非编码区为３９ ｂｐ，３端非编码区为４５ ｂｐ，开放阅读框为１ ５７５ ｂｐ，可编码５２4个氨基酸；ＰｏＬＥＣ２蛋白的分子量约５８．０ ｋＤ，等电点为５．２；ＰｏＬＥＣ２蛋白包含一个信号肽序列、一个ＭＡＭ－２结构域和一个Ｃ型凝集素的糖识别结构域。同源性分析结果表明，ＰｏＬＥＣ２与其他物种Ｃ型凝集素的糖识别结构域序列的同源性在２６．５％～３３．６％，相似性在４５．１％～５５．６％。组织表达分析表明，ＰｏＬＥＣ２基因在肝胰脏、鳃、外套膜、性腺及肠组织中均有表达，经溶藻弧菌刺激后８ｈ在肠组织中的表达量显著上调。 　　关键词：合浦珠母贝；Ｃ型凝集素；序列特征；表达分析 　　中图分类号：Ｓ９１７．４ 文献标识码：Ａ 文章编号：0439－８11419－4026-05 　　 　　Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ａ Ｎｏｖｅｌ Ｃ－ｔｙｐｅ Ｌｅｃｔｉｎ Ｇｅｎｅ ｆｒｏｍ Ｐｅａｒｌ Ｏｙｓｔｅｒ Ｐｉｎｃｔａｄａ fucata 　　 　　ＨＵ Ｙｕ－ｔｉｎｇ１，２，ＺＨＡＮＧ Ｄｉａｎ－ｃｈａｎｇ１，ＪＩＡＮＧ Ｓｈｉ－ｇｕｉ１，ＳＵ Ｔｉａｎ－ｆｅｎｇ１，ＣＵＩ Ｓｈｕ－ｇｅ１，３，ＧＵＯ Ｈｕａ－ｙａｎｇ１，２，ＣＨＥＮ Ｍｉｎｇ－ｑｉａｎｇ１ 　　 　　 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｅ ｃＤＮＡ ｌｉｂｒａｒｙ ｗａｓ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｐｅａｒｌ ｏｙｓｔｅｒ． Ａ Ｃ－ｔｙｐｅ ｌｅｃｔｉｎ ｇｅｎｅ， ｎａｍｅｄ ａｓ ＰｏＬＥＣ２， ｗａｓ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｂｙ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ａｎｄ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ using ＥＳＴ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ． Ｔｈｅ ｌｅｎｇｔｈ ｏｆ ＰｏＬＥＣ２ ｃＤＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｗａｓ １ ６５９ ｂｐ． Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｏｐｅｎ ｒｅａｄｉｎｇ ｆｒａｍｅ ｏｆ ＰｏＬＥＣ２ ｇｅｎｅ ｗａｓ １５７５ ｂｐ． Ｔｈｅ ５-ＵＴＲ ｌｅｎｇｔｈ ｗａｓ ３９ ｂｐ ａｎｄ ３-ＵＴＲ ｌｅｎｇｔｈ ｗａｓ ４５ ｂｐ． Ｔｈｅ ＰｏＬＥＣ２ ｇｅｎｅ ｅｎｃｏｄｅｄ ａ ｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ５２4 ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ， ａｎｄ ｔｈｅ ｐｒｅｄｉｃｔｅｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｗｅｉｇｈｔ ｏｆ ＰｏＬＥＣ２ ｐｒｏｔｅｉｎ ｗａｓ ａｂｏｕｔ ５８．０ ｋＤ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｉｓｏｅｌｅｃｔｒｉｃ ｐｏｉｎｔ ｏｆ ５．２． Ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ ＰｏＬＥＣ２ ｇｅｎｅ ｃｏｎｔａｉｎｅｄ ａ ｓｉｇｎａｌ ｐｅｐｔｉｄｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｗｉｔｈ １６ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ ， ａ ＭＡＭ－２ ｄｏｍａｉｎ ａｎｄ ａ ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｄｏｍａｉｎ ｏｆ Ｃ－ｔｙｐｅ ｌｅｃｔｉｎ． Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｉｄｅｎｔｉｔｙ ａｎｄ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｄｏｍａｉｎ ｏｆ ＰｏＬＥＣ２ ｇｅｎｅｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ Ｐ． fucata ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｏｒｇａｎｉｓｍｓ were ２６．５％~３３．６％ ａｎｄ ４５．１％~５５．６％ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ｔｉｓｓｕｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ＰｏＬＥＣ２ ｇｅｎｅ ｗａｓ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ａｌｌ ｔｉｓｓｕｅs ｏｆ Ｐ． fucata， ａｎｄ ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ｍａｘｉｍｕｍ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ ａｆｔｅｒ ８ ｈｏｕｒｓ ｏｆ ｔｈｅ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ． 　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｐｉｎｃｔａｄａ fucata； Ｃ－ｔｙｐｅ ｌｅｃｔｉｎ； ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｆｅａｔｕｒｅｓ； ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ 　　 　　Ｃ型凝集素为一类钙离子依赖活性的糖蛋白，具有至少一个糖识别结构域，能够识别和结合细胞膜表面的糖基，其结合糖基具有专一性，即一种凝集素只能结合一种糖基［１，２］。Ｃ型凝集素是一种模式识别受体蛋白，主要有Ｍａｎ型配体和Ｇａｌ型配体，Man型配体与Ｄ－甘露糖、Ｄ－葡萄糖结合，Gal型配体与Ｄ－半乳糖及其衍生物结合［２］。ＰＲＲ蛋