β-葡萄糖苷酶(β-glucosidase, β-gc)试剂盒使用说明.pdf

β-葡萄糖苷酶 （β-Glucosidase, β-GC）试剂盒使用说明 分光光度法50管/24样 货号：G8830-100 产品简介： β-GC （EC 1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化β-糖苷键 水解，具有多方面生理作用：在纤维素的糖化作用中，β-GC负责进一步水解纤维素二糖和 纤维素寡糖生成葡萄糖；β-GC水解萜烯类香气前驱体，使糖苷键合态变成游离态。从而产 生香味；β-GC能够水解植物体内野黑樱苷，释放HCN，从而防止昆虫取食。 β-GC分解对-硝基苯-β-D-吡喃葡萄糖苷生成对-硝基苯酚，后者在400nm有最大吸收 峰，通过测定吸光值升高速率来计算β-GC活性。 试验中所需的仪器和试剂： 可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1ml玻璃比色皿、研钵、冰和 蒸馏水。 产品内容： 提取液：液体50ml×1瓶，4℃保存。 试剂一：粉剂×2瓶，-20℃保存；临用前每瓶加入 10ml双蒸水，充分溶解备用；用不 完的试剂仍-20℃保存。 试剂二：液体25ml×1瓶，4℃保存。 试剂三：液体50ml×1瓶，4℃保存。 操作步骤： 一、样品的前处理： 1. 细菌或培养细胞： 先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量 （10 个）：提取4 液体积 （ml）为500~1000：1的比例 （建议500万细菌或细胞加入 1ml提取液），超声波破 碎细菌或细胞 （冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；15000g4℃离 心10min，取上清，置冰上待测。 2. 组织： 按照组织质量 （g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例 （建议称取约0.1g组织，加入 1ml提取液），进行冰浴匀浆。15000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 二、测定步骤： 1. 分光光度计预热30min 以上，调节波长至400nm，蒸馏水调零。 2. 加样表 试剂名称 （μl） 对照管 测定管 试剂一 400 试剂二 500 500 样本 100 100 迅速混匀，放入37℃准确水浴30min后，立即放入沸水浴中煮沸5min （盖紧，以防止水分散 失），流水冷却后充分混匀 （以保证浓度不变） 试剂一 400 充分混匀，8000g，4℃，离心5min，取上清液 上清液 500 500 试剂三 1000 1000 充分混匀，室温静置2min后，用对照管调零，400nm处测定吸光值A，计算ΔA A测定管-A 对照管。每个测定管需设一个对照管。 β- GC 活力单位的计算： 标准条件下测定的回归方程为y 0.32x -0.0027；x为标准品浓度 （μmol/ml），y为 吸光值值。 （1）按样本蛋白浓度计算： 单位的定义：每mg组织蛋白每小时产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。