色谱层析技术简介.ppt

张雪霞 2008年6月;脱色树脂 简介;1 树脂脱色 树脂脱色是活性碳、DEAE、H2O2等脱色手段之外的另一种选择,常会取得令人惊异的效果。 树脂在干燥状态下其内部具有较高的孔隙率,表面积较大、交换速度较快、机械强度高、抗污染能力强、热稳定好,在水溶液和非水溶液中都能使用。 具有很好的吸附性能, 理化性质稳定,不溶于酸、碱及有机溶剂,对有机物选择性较好,不受无机盐类及强离子低分子化合物存在的影响,可以通过物理吸附从水溶液中有选择地吸附有机物质。;植物子实体多糖脱色，分别用活性炭、DEAE、双氧水和AB-8型弱极性吸附树脂进行脱色,结果显示,从脱色率和多糖保存率考虑,树脂的脱色效果要明显优于活性炭和双氧水。 ; ; 由于植物材料的不同、实验室条件等不同,脱色方法也不相同,对于植物来源的多糖,所含色素大多是负性离子,用活性炭等吸附脱色效果不如弱碱性树脂DEAE、D280、D392、DuoliteA-7或用Al2O3层析柱。若糖与色素是结合的,易被DEAE纤维素吸附,不能用水洗脱,那么这类色素可进行氧化脱色。活性炭由于简单易行,被广泛应用,但是在应用的过程中应进行试验优化出最佳的脱色条件。 ; 大孔吸附树脂简介;;大孔吸附树脂为吸附和筛选原理相结合的分离材料。它的吸附性能是由于范德华引力或生成氢键的结果。筛选原理是由于材料本身多孔性结构所决定。 由于吸附和分子筛的双重作用有机化合物可根据吸附力的不同及分子量大小的不同,被吸附树脂吸附后再经一定溶剂洗脱而得到分离。 吸附树脂分离技术就是将发酵液或植物提取液通过大孔树脂,吸附其中的有效成分,再经洗脱回收,除掉杂质的一种纯化精制的方法。可根据料液成分的不同,提取成分的不同,选择不同型号的树脂。;3 树脂预处理及再生 3.1 预处理 大孔树脂一般含有未聚合的单体、致孔剂、引发剂及其分解物、分散剂和防腐剂等脂溶性杂质,因而购来的树脂要除去可能存在的毒性有机残留物,应先进行预处理. 一般选用甲醇、乙醇或丙酮连续洗涤数次,洗至加适量蒸馏水至中性即可.树脂用久了吸附的杂质就会增多,降低其吸附能力,故使用适量乙醇洗至无白色浑浊现象,再用蒸馏水洗至无醇味即可.;3.2 树脂再生 所用的溶剂有乙醇、甲醇、丙酮、异丙醇及稀酸、稀碱溶液等,分为简单再生和强化再生. 简单再生的方法是用不同浓度的溶剂按极性从大到小梯度洗脱,再2~3倍树脂床体积(BV)的稀酸、稀碱溶液浸泡洗脱,水洗至pH值中性即可使用. 树脂经过几次简单的再生后,如果吸附性能下降较多需强化再生.强化再生的方法是先用不同浓度的有机溶剂洗脱,然后反复用大体积的稀酸、稀碱溶液交替强化洗脱,再水洗至PH值中性即可使用.;4 树脂分类及选用原则 4.1树脂分类 国内外使用的树脂种类众多,型号各异,性能差异较大. 大孔吸附树脂通常依其极性分为非极性、弱极性、极性三类,树脂的结构一般为苯乙烯、丙烯酸酯或甲基丙烯酸酯、丙烯酸或氧化氮类. 树脂吸附性能的优劣是由其化学和物理结构决定的,同一型号大孔吸附树脂上的吸附能力有差异,不同树脂结构对不同物质吸附效果不同.;;;人参总皂苷的提取分离： 考察了D-101型大孔吸附树脂富集纯化人参总皂苷的吸附性能与洗脱参数。人参总皂苷洗脱率在90%以上,富集于50%乙醇洗脱液部分,干燥后总固形物中人参总皂苷纯度达60.1%。 黄芪皂苷的提取分离：　 AB-8树脂对皂苷有特殊的选择性,适合从水溶液中提取皂苷和某些有机物质,综合考虑黄芪皂苷粗品得率和皂苷含量,用60%的乙醇提取, 80%的乙醇洗脱时效果比较好。 ;绞股蓝皂苷的提取分离　 绞股蓝皂苷属达玛烷型四环三萜类衍生物,有关其提取纯化方法已有不少报道,树脂吸附法被认为是目前最好的生产工艺。通过对7种吸附树脂(AASI-2、H-103、X-5、NKA-9、VAD-2、XAD-4、XAD-2、AB-8)进行筛选实验,发现AASI-2树脂对绞股蓝皂苷的吸附量大,速率快,且易于洗脱,回收率高,有可能成为绞股蓝皂苷生产中一种性能优良的吸附剂。 西洋参皂苷的提取分离　 通过大孔树脂D4020,用水洗脱至无色,续用85%乙醇洗脱,回收乙醇得浸膏,再用95%乙醇搅拌,静置2h,过滤,回收乙醇得总皂苷93g。;其它类皂苷的提取分离 　 采用D-3520型大孔吸附树脂提取分离黄褐毛忍冬总皂苷,明显提高皂苷的收率和纯度。 大孔吸附树脂用于纯化毛冬青总皂苷,洗脱率可达95%,50%乙醇洗脱液干燥后总固物中毛冬青总皂苷纯度可达57.5%。 用带有CN基的DA-201型大孔树脂柱吸附,以水或稀低级醇洗脱,收集洗脱液,回收液剂后得到的甘草酸纯度可达90%以上。;5.2 黄酮类化合物分离纯化方法