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醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质PPT
;;二、实验原理（一）;二、实验原理（二）;醋酸纤维薄膜电泳可将血清蛋白分成五条主要区带，从正极端起依次为清蛋白/白蛋白Alb， α1-球蛋白，α2-球蛋白，β-球蛋白, γ-球蛋白。这些蛋白经过染色处理，可展示出清晰的蛋白电泳图谱。如下图所示。;三、实验器材;醋酸纤维薄膜（CAM,2 cm×8cm）：1片/人。 染色缸1个，公用。 漂洗缸3个，公用。 点样器：公用。 滤纸：公用。 镊子：公用。 ; 脱色摇床; 扫描仪;四、实验试剂;迎着光辨别醋酸纤维薄膜（CAM）的光面和毛面。 在毛面的一端1.5cm处，用直尺和铅笔轻划一横线，做点样标记，并用铅笔标号。 将已经编号、标记的CAM膜以毛面朝下的方式浸入巴比妥缓冲液中，浸泡30 min。;电泳装置由电泳槽和稳压电源两部分组成，两者之间有专门的连线连接。电泳槽的正负极各有一个装缓冲液的槽，红色为正极，黑色为负极。 电泳???置于水平台，两侧注入等量的巴比妥缓冲液，使其在同一水平面。用双层纱布搭桥。;1）用镊子取出浸透的薄膜，夹在两层粗滤纸内吸干多余的缓冲液，然后平铺在桌子上（毛面朝上）。 2）在一次性手套上滴一滴血清（3-5μl），用点样器在血清上蘸一下，再将点样器轻印在CAM膜的点样线上，待血清完全渗透到薄膜内后移开。 ;1）将加样后的薄膜，毛面向下，垂直架于电泳槽的游杆两端，点样端置于负极，纱布将膜的两端与缓冲液连通 2）将电泳槽的正极和负极分别与电泳仪的正极、负极连接，打开电源，低压，平衡5min。调节电压至90-150V (110V),稳压电泳45min。 3）待电泳区带展开约25-35mm后，关闭电源。; 电泳完毕后，取出薄膜，以毛面朝下的方式浸于丽春红S染色液中，染色5-10min。 ; 将漂洗好的CAM薄膜放置在滤纸上，吸干水分，放入扫描仪中进行扫描，并用软件分析各种蛋白质的相对含量。; 薄膜的浸润是电泳成败的关键之一。 点样时，应将薄膜表面多余的缓冲液用滤纸吸去，但不宜太干。 点样时，动作要轻、稳，用力不能太大。 电泳时应选择合适的电压，一般稳压在为110 V。 通电时，不得接触槽内的缓冲液或CAM，以防触电。 电泳槽缓冲液的液面要保持一定的高度，同时电泳槽两侧的液面应保持在同一水平，否则，通过薄膜时有虹吸现象，影响蛋白分子的泳动速度。;七、实验结果;正常参考值;九、临床意义;异常的血清蛋白电泳可见以下疾病：;八、方法学评价;电泳时，血清样品点在支持介质的哪一端，为什么？ 电泳图谱清晰的关键是什么？
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