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UTP23基因在A2780Taxol细胞中表达及对紫杉醇化疗耐药的影响 　　[摘要] 目的 探讨上皮性卵巢癌紫杉醇耐药细胞（A2780/Taxol）中UTP23基因表达水平及其对紫杉醇化疗耐药的影响。 方法 利用Real-Time PCR与Western blot分别从基因与蛋白表达水平检测A2780/Taxol 细胞中UTP23的表达水平，通过脂质体在A2780/Taxol 细胞中特异性瞬时过表达UTP23基因，利用MTT细胞增殖法观察过表达UTP23基因对A2780/Taxol 细胞药物敏感性的影响；通过Real-Time PCR检测A2780/Taxol 细胞过表达UTP23后抗凋亡基因Bcl-2蛋白表达水平。 结果 A2780/Taxol中UTP23的mRNA表达水平降低，约为A2780细胞的50%，UTP23蛋白表达水平下降，约为A2780细胞的48%（P 　　[关键词] UTP23基因；紫杉醇；A2780/Taxol细胞；Bcl-2 　　[中图分类号] R737.31 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2017）08-0086-04 　　[Abstract] Objective To investigate the expression of UTP23 gene in paclitaxel-resistant epithelial ovarian cancer cells（A2780/Taxol） and its effect on drug resistance of paclitaxel chemotherapy. Methods Real-Time PCR and Western blot were used to detect the expression level of UTP23 in A2780/Taxol cells from the level of gene and protein expression. The UTP23 gene was transiently over-expressed in A2780/Taxol cells via liposomes. The effect of the over-expressed UTP23 gene on the drug sensitivity of A2780/Taxol cells was observed by MTT cell proliferation method. The expression of anti-apoptotic gene Bcl-2 protein after over-expression of UTP23 gene in A2780/Taxol cells was detected by Real-Time PCR. Results The expression level of UTP23 mRNA in A2780/Taxol decreased，which was about 50% of A2780 cells. And the UTP23 protein expression level decreased，which was 48% in A2780 cells（P 　　1 材料与方法 　　1.1 细胞株及培养 　　上皮性卵巢癌细胞株A2780与上皮性卵巢癌紫杉醇耐药细胞株A2780/Taxol均购于中国科学院细胞库，均使用含有10%胎牛血清的RPMI1640完全培养液，在37℃、5%CO2条件下恒温培养，取对数生长期细胞进行实验。 　　1.2 实验材料 　　胎牛血清购自Gibco公司，噻唑蓝（MTT）、RPMI1640培养液、紫杉醇均购自Sigma公司，BCA蛋白浓度测定盒购自碧云天生物技术公司，兔抗人UTP23抗体、兔抗人Bcl-2抗体、抗GAPDH抗体及相对应的二抗均购自美国Abcam公司，脂质体转染试剂、阴性对照转染试剂购自Santa Cruz公司，qRT-PCR试剂盒购自Takara公司。 　　1.3 RT-PCR测定UTP23基因表达 　　取对数生长期的A2780细胞与A2780/Taxol细胞，使用Trazol裂解液提取细胞总RNA，按照Takara公司提供的逆转录试剂盒说明书合成cDNA。以GAPDH作为内参，进行UTP23基因扩增。反应条件为：95℃预变性30 s，95℃ 5 s，60℃ 20 s 40个循环。应用2-ΔΔCt方法分别计算A2780细胞与A2780/Taxol细胞UTP23基因的相对表达量，重复3次实验。 　　1.4 Western blot蛋白印迹法测定UTP23蛋白表达水平 　　取对数生长期的A2780细胞