正常组织和胰腺癌组织中差异表达蛋白的鉴定精选.pdfVIP

V01．30 高等学校化学学报 No．2 2009年2月 CHEMICALJOURNAl。OFCHINESEUNIVERSITIES 302～307 正常组织和胰腺癌组织中差异表达蛋白的鉴定 金红1，一，狄扬3，陈耀辉2，傅德良3，杨芄原1’2 (1．复旦大学化学系，上海200433；2．复旦大学生物医学研究院，上海200032； 3．复旦大学附属华山医院，上海200030) 摘要采用双向凝胶电泳和生物质谱技术，对12对胰腺癌组织和癌旁组织样品、3个胰腺良性疾病样品、3 个正常胰腺组织样品的蛋白质进行了分离和鉴定，获得了重复性较好的双向凝胶电泳图谱；鉴定了胰腺癌 和癌旁组织的差异表达蛋白质，发现了30个差异表达蛋白质；应用MALDI-TOF：MS／MS技术对差异表达蛋 白质进行鉴定，共有24个蛋白质得到鉴定，其中15个蛋白质在胰腺癌组织中表达上调，9个蛋白质表达下 调．这些蛋白质与胰腺癌的发生相关，可能成为胰腺癌的分子标志物和药物治疗的靶蛋白． 关键词胰腺癌；蛋白质组差异表达谱；双向凝胶电泳；生物质谱 中图分类号0629．73；0657文献标识码A 随着人类基因组计划的初步完成，生命科学的热点研究领域已经从基因组学转向蛋白质组学和代 谢组学，并在此基础上形成了研究生命体多系统、多层次动态变化的系统生物学，这将是2l世纪生命 科学研究的主要方向．建立组织的蛋白质双向凝胶电泳数据库是蛋白质组学研究必不可少的基础，通 过对某一器官肿瘤组织与癌旁组织、正常组织所表达的不同蛋白质组的对比分析，可以找出其中的差 异表达蛋白质．对于这些差异蛋白质的深入研究，将有助于发现肿瘤相关蛋白质，从而进一步探索肿 瘤的发生及生长机制，为肿瘤的早期诊断提供蛋白分子标志物，也为肿瘤的治疗提供靶向蛋白．国际 上已经启动了肝癌、乳腺癌及结肠癌等多个肿瘤蛋白质组研究项目，并初步建立了相关的蛋白质双向 凝胶电泳数据库，但与胰腺癌相关的蛋白质组学研究仍较少．目前对于胰腺癌的发病机制仍不明确， 而早期诊断仍缺乏有效的肿瘤标志物．近年来蛋白质组学技术的发展为胰腺癌的研究开拓了一条 新途径． 目前，蛋白质组研究技术发展很快，新的研究技术和研究手段，如毛细管等电聚集、多维色谱、分 子扫描仪和微流芯片等不断涌现．而双向凝胶电泳技术自0 历史，但它仍是蛋白质组研究中的主要支撑技术之一，原因在于双向凝胶电泳技术具有高分辨率、高 重复性、微量分析和制备等优势，使之始终作为蛋白质组学研究中经典的蛋白质分离方法．因此，任 何影响等电聚焦和凝胶电泳的因素都会导致双向电泳图谱质量的下降，影响后期蛋白质的质谱鉴定． 本实验探讨了胰腺样品制备、裂解液、上样量及染色等实验条件，获得了重复性较好的双向凝胶电泳 图谱． 1 实验部分 1．1试剂、仪器及样品来源 物工程有限公司；甘氨酸和十二烷基硫酸钠(SDS)购自上海生工生物工程有限公司；尿素(华美生物工 程有限公司)；双丙烯酰胺(Fluka macia 收稿日期：2008-04．-01． 基金项目：国家自然科学基金(批准号资助． 联系人简介：杨苊原，男，博士．教授，博士生导师，主要从事蛋白质组学研究．E-mail：pyyang@fudan．edu．cn 傅德良，男。博士，教授，博士生导师，主要从事胰腺病研究．E-mail：surgeonfu@yahoo．corn．cn 万方数据万方数据 No．2 金红等：正常组织和胰腺癌组织中差异表达蛋白的鉴定 303 基水杨酸[a—Cyano-4一hydroxycinnamic SequencingGrade)均 QM· 油、过硫酸铵、硝酸银和碳酸氢钠等均为国产分析纯试剂；实验用水为Milli-Q去离子水(18 cm)． Pharmacia公司，切 4700蛋白质组分析仪(AppliedBiosystems公司)