高等植物有性杂交.pptVIP

一、花粉萌发测定法 1、原理 正常的成熟花粉具有较强的活力，在适宜的培养条件下便能萌发和生长，在显微镜下可直接观察计算其萌发率，以确定其活力。 2、器材与用具 载玻片;显微镜;玻棒;恒温箱;培养皿;滤纸。 3、试剂 16种液体培养基 (不同浓度的蔗糖，硼酸，PEG, Ca(NO3)2·4H2O, MgSO4.7H2O等)。 4、方法 取即将散粉的花药置于1.5 mL离心管中，每个离心管中置2枚采自不同小花的花药，以降低花粉发育时期不同给试验造成的误差。 在离心管中加入等量(均为4滴) 新配制的培养液，用镊子夹破花药，释放出花粉粒，扣上离心管盖子，分别在5℃、10℃、15℃、20℃、25℃、30℃、35℃、40℃、45℃条件下培养30 min，培养后放在1～4℃冰箱中保存。 取适量培养后的花粉滴于载玻片上,加盖盖玻片, 用显微镜(10×10)观察花粉萌发及花粉管长度情况。 花粉萌发以花粉管长度大于花粉粒直径为准。每个玻片观察3～5个视野，统计萌发率，所有试验均重复3次，各处理每次统计100个花粉粒以上。 测量花粉管长度。 萌发率=萌发花粉粒数目/ 观察花粉粒总数×100 % 二、花粉萌发测定法 3、试剂 培养基(10％蔗糖，10Mg／L硼酸，0.5％的琼脂)：称10g蔗糖、1Mg硼酸、0.5g琼脂与90Ml水放入烧杯中，在100℃水浴中溶化，冷却后加水至100Ml备用。 4、方法 (1)将培养基熔化后，用玻棒蘸少许，涂布在载玻片上，放入垫有湿润试纸的培养皿中，保湿备用。 (2)采集将要开放的成熟花朵，将花粉洒落在涂有培养基的载玻片上，然后将载玻片放置于垫有湿滤纸的培养皿中，在25℃左右的恒温箱(或室温20℃条件下)中孵育，5～10Min后在显微镜下检查5个视野，用显微镜(10×10)观察花粉萌发及花粉管长度情况。 花粉萌发以花粉管长度大于花粉粒直径为准。每个玻片观察3～5个视野，统计萌发率，所有试验均重复3次，各处理每次统计100个花粉粒以上。 测量花粉管长度。 萌发率=萌发花粉粒数目/ 观察花粉粒总数×100 % 三、碘—碘化钾染色测定法 1、原理 多数植物正常的成熟花粉粒呈球形，积累较多的淀粉，I2-KI溶液可将其染成蓝色。发育不良的花粉常呈畸形，往往不含淀粉或积累淀粉较少，I2-KI溶液染色呈黄褐色。因此，可用I2-KI溶液染色来测定花粉活力。 2、器材与用具 显微镜；载玻片与盖玻片；镊子；棕色试剂瓶；烧杯；量筒；天平。 3、试剂 I2-KI溶液：取2gKI溶于5～10Ml蒸馏水中，加入1g I2，待完全溶解后，再加蒸馏水300Ml。贮于棕色瓶中备用。 4、方法 采集水稻、小麦或玉米可育和不育植株的成熟花药，取一花药于载玻片上，加1滴蒸馏水，用镊子将花药捣碎，使花粉粒释放，再加1-2滴I2-KI溶液, 盖上盖玻片，在显微镜下观察。凡是被染成蓝色的为含有淀粉的活力较强的花粉粒，呈黄褐色的为发育不良的花粉粒。观察2～3张片子，每片取5个视野，统计花粉的染色率，以染色率表示花粉的育性。 【注意事项】 此法不能准确表示花粉的活力，也不适用于研究某一处理对花粉活力的影响。因为三核期退化的花粉已有淀粉积累，遇碘呈蓝色反应。另外，含有淀粉而被杀死的花粉粒遇I2-KI也呈蓝色。 二、原理 正常的成熟花粉具有较强的活力，在适宜的培养条件下能萌发和生长, 在显微镜下可直接观察并计算其萌发率，以确定其活力。 三、实验材料及用具 由不同浓度蔗糖, MgSO4.7H2O，PEG，硼酸配制的液体培养基；油菜花。 载玻片；显微镜；玻棒；恒温箱；培养皿；滤纸；离心管。 四、实验方法 取即将散粉的花药置于1.5 mL离心管中，每个离心管中置2枚采自不同小花的花药，以降低花粉发育时期不同给试验造成的误差。 在离心管中加入等量(均为4滴) 新配制的培养液，用镊子夹破花药，释放出花粉粒，扣上离心管盖子，分别在5℃、10℃、15℃、20℃、25℃、30℃、35℃、40℃、45℃条件下培养30 min，培养后放在1～4℃冰箱中保存。 取适量培养后的花粉滴于载玻片上,加盖盖玻片, 用显微镜(10×10)观察花粉萌发及花粉管长度情况。 花粉萌发以以花粉管长度大于花粉粒直径为准。每个玻片观察3～5个视野，统计萌发率，所有试验均重复3次，各处理每次统计100个花粉粒以上。 测量花粉管长度。 萌发率=萌发花粉粒数目/ 观察花粉粒总数×100 % 五、结果与分析 一、实验目的 在农作物杂交育种、作物结实机理和花粉生理研究中，常涉及花粉活