乳酸菌载体pMG36e的应用现状精选.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００９，２９（１１）：１０６～１１１ 乳酸菌载体ｐＭＧ３６ｅ的应用现状 １ ２ １ １ １ 丁寅寅 　马会勤 　左芳雷 　郝彦玲 　陈尚武 （１中国农业大学食品科学与营养工程学院　北京　１０００８３　２中国农业大学农学与生物技术学院　北京　１００１９３） 摘要　乳酸乳球菌通用表达质粒ｐＭＧ３６ｅ是一个经典的人工构建的组成型表达载体，是以乳酸乳 球菌乳脂亚种蛋白酶基因的转录和翻译信号为基础构建而成的。它包含一个强启动子，能够在 多种细菌中表达外源蛋白。已用于研究细菌素作用机制，乳酸菌基因工程菌株的改造以及口服 疫苗的开发等，应用领域十分广泛，已成为乳酸菌基因工程研究的重要工具质粒之一。现主要从 载体构成、基因表达与食品级载体改造等三方面的应用对其进行综述，旨在为该质粒今后研究提 供资料。 关键词　ｐＭＧ３６ｅ　表达载体　食品级载体　乳酸菌 中图分类号　Ｑ７８２ 　　乳酸菌 （ｌａｃｔｉｃａｃｉｄｂａｃｔｅｒｉａ，ＬＡＢ）是一类能够发 ［１］ １　载体构成 酵糖类产生乳酸的革兰氏阳性细菌 ，具有诸如缓解 乳糖不耐症、调节消化道微生态平衡等益生作用，应用 　　载体ｐＭＧ３６ｅ由强启动子ｐ３２及其下游的部分开 领域十分广泛。随着近二十几年来分子生物学的发 放阅读框、多克隆位点和来 自乳酸乳菌乳脂亚种 展，以乳酸菌作为宿主，利用质粒表达外源基因，对乳 （Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓｌａｃｔｉｓｓｕｂｓｐ．ｃｒｅｍｏｒｉｓＷｇ２）蛋 白酶基因 ［８］ 酸菌进行改造以进一步提高其功能已成为目前的研究 （ｐｒｔＰ） 的转录终止子以及ｐＷＶ０１复制子和来自于质 ［９］ 热点之一。 粒ｐＥ１９４ 的红毒素抗性基因Ｅｍｒ构成，质粒大小为 　　乳酸菌常用质粒载体主要有 ｐＷＶ０１衍生载体， ３．６ｋｂ。质粒 ｐＭＧ３６ｅ的构成使其有利于表达外源基 ［２］ 因。其中强启动子 Ｐ３２于 １９８７年由ＶａｎＤｅｒＶｏｓｓｅｎ ｐＮＺ系列载体 等。质粒 ｐＭＧ３６ｅ来源于 ｐＷＶ０１载 ［３］ ［１０］ 体，于１９８９年由ＶａｎＤｅＧｕｃｈｔｅ 以乳酸乳球菌乳脂亚 等 利用鸟枪法从乳脂链球菌（Ｓ．ｃｒｅｍｏｒｉｓＷｇ２）克隆 种蛋白酶基因的转录和翻译信号为基础构建而成，质 得到，Ｐ３２包括开放阅读框架和一个能够被大肠杆菌 粒大小约为３．６ｋｂ，便于宿主携带，可表达被克隆的各 （Ｅ．ｃｏｌｉ）、枯草芽孢杆菌（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、乳链球菌（Ｓ． 种基因。目前已在乳球菌属（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ），链球菌属 ｌａｃｔｉｓ）识别的核糖体结合位点。ｐＷＶ０１复制子来源于 ［１１］ （Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ），乳杆菌属（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）等中成功表达 广宿主乳球菌质粒ｐＷＶ０１ ，能在一系列细菌中行使 ［４］ ［５］ 功能，这其中包括大肠杆菌（Ｅ．ｃｏｌｉ），枯草杆菌（Ｂ． 如溶菌酶、苯丙氨酸氨酶 、枯草杆菌中性蛋白酶 ， ［６］ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、乳球菌、乳杆菌、化脓性链球菌（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ） 以及超氧化物歧化酶 等以及其他蛋白基因，近年来 ［７］ 和血链球菌（