9组织培养第九章　植物脱毒技术PPT.pptVIP

第九章 植物脱毒技术宜职院08.9 目的与要求 了解脱毒意义，学习植物茎尖脱毒原理及其操作程序，了解其他组织脱毒方法及应用，掌握植物理化脱毒方法。学习植物脱毒苗的鉴定方法，掌握各方法的鉴定原理，了解植物脱毒苗的保存和繁殖方法。 具备植物茎尖脱毒技术基础，具有指示植物鉴定脱毒苗的基本能力，有脱毒苗保存的认知。 全世界已发现植物病毒有近788种。 病毒的危害： 组织和细胞病变 新陈代谢等生理机能受到干扰 外观表现不正常状态 由于危害可通过营养体传给后代，病毒对寄主植物可造成毁灭性危害，导致大幅度减产，甚至全株死亡。世界作物生产中，病毒危害程度仅次于真菌。 危害一些植物的病毒数目 植物种类 感染病毒种类 植物种类 感染病毒种类 植物种类 感染病毒种类 菊花 19 矮牵牛 5 苹果 36 康乃馨 11 百合 6 柑橘 23 水仙 4 马铃薯 17 葡萄 26 唐菖蒲 5 大蒜 24 草莓 24 风信子 3 豌豆 15 桃 23 月季 10 樱桃 44 梨 11 第一节 脱毒方法 一、茎尖培养脱毒（一）通过茎尖培养脱毒的原理 1、病毒在植物体内的分布 病毒浓度不同，离尖端越远病毒浓度越高。茎尖或根尖，离体培养便可获得无病毒再生植株。 2、茎尖大小与脱毒 茎尖外植体的大小与脱毒效果成反比。茎尖分生组织不能合成自身需要的生长素，但下部叶原基能提供，因而带叶原基的茎尖生长快，成苗率高。但茎尖越大，脱毒效果差。 （二）茎尖脱毒方法1、取样与消毒 可直接选定的植株上取顶芽进行消毒接种。采顶芽与侧芽消毒接种 。 消毒方法是：剪取顶芽梢段3、5厘米，剥去大叶片，用自来水冲洗干净，在75%酒精中浸泡30秒左右，用1%-3次氯酸钠或5%-7%的漂白粉溶液消毒10-20分，最后用无菌水冲洗材料4-5次。  酒精擦拭手 外植体消毒 浸泡5min 器械消毒 酒精灯灼烧 酒精擦拭培养皿 2、茎尖剥离和接种 将已消毒的芽放在带滤纸的培养皿上—器械固定—解剖镜下剥去幼叶—切下带1-2个叶原基的生长点（0.3-0.5mm）—切下的茎尖转至培养基上（顶部向上）。 酒精擦拭 旋转灼烧 显微镜下获取茎尖 接种 盖好瓶塞 脱毒马铃薯试管苗 3．培养 25+2℃ ，1500-5000LX，10-16h 一般光照培养比暗培养效果好。其间应更换新鲜培养基。提高培养基中BA的浓度可形成大量从生芽。4．生根诱导 诱导生根的方法是将2-3cm高的无根苗转入生根培养基继续培养1-2个月可生根。 （三）培养基与培养方式 1、培养基：MS， White , Morel等 2、培养方式：一般采用半固体培养基。（四）影响茎尖脱毒效果的因素（茎尖脱毒技术的关键） 植物种类、病毒种类、剥离茎尖的大小（0.3-0.5mm带1-3个叶原基）、培养基营养 用于脱毒的适宜茎尖大小 植物 病毒名称 剥离茎尖大小 （mm） 植物 病毒名称 剥离茎尖大小 （mm） 马铃薯 马铃薯卷叶病毒马 1.0～3.0 百合 花叶病 0.2～1.0 铃薯Y病毒 1.0～3.0 鸢尾 花叶病 0.2～0.5 马铃薯X病毒 0.2～0.5 菊花 各种病毒 0.2～1.0 马铃薯G病毒 0.2～0.3 康乃馨 各种病毒 0.2～0.8 马铃薯S病毒 0.2以下 大丽花 花叶病 0.6 甘薯 斑纹花叶病毒 1.0～2.0 大蒜 花叶病毒 0.3～1.0 缩叶花叶病毒 1.0～2.0 甘蔗 花叶病 0.7～3.0 羽毛状花叶病毒 0.3～1.0 草莓 各种病毒 0.2～1.0 二、热处理脱毒 脱毒原理 即热处理脱毒，一些病毒对热不稳定，在高于常温的温度下（35-40度）即钝化失活。 1、温汤浸渍处理脱毒法 材料置于50℃左右热水中浸渍几十分钟到数小时。 特点：简单易行，成本低，但易使材料受伤。适用：甘蔗、木本植物和休眠器官的处理。  2、热空气处理脱毒法 将植物用35～40℃的热空气处理2～4周或更长时间。特点：损伤较小，操作简便，须严格控制温度时间适用：多数植物 3、热处理结合茎尖培养脱毒 目前常采用将热处理和茎尖分生组织培养结合起来的方法脱毒。 特点：既可缩短热处理时间，提高植株成活率，又可剥离较大的茎尖，提高茎尖培养的成活率和脱毒率。 适用：大多数植物，并可除去一般培养难以去除的纺锤块茎类病毒 三、其他组织培养脱毒方法（一）愈伤组织培养脱毒 将感染病毒的组织离体培养获得愈伤组织，再诱导愈伤组织分化成苗，从而获