7第七章-植物快速繁殖和脱毒PPT.ppt

2.2 材料的培养和灭菌 供试植株要种在无菌土中，温室种植。 也可去插条在室内溶液培养。 定期喷施杀菌剂（如链霉素）也有效。 2.3 茎尖剥离 取幼苗茎尖2～3cm小段，剥去可见的大叶，自来水冲洗1h左右后进入无菌室。 先用95%酒精快速浸泡一下，再放入5%漂白粉消毒7～10min（或5%次氯酸钠溶液），然后无菌水冲洗3～4次， 在双筒解剖下剥去幼叶，露出圆滑的生长点，用解剖针切取带1～2个叶原基的生长点，接种到培养基上进行培养。 这种外植体（生长锥带1～2个原叶基）的培养，严格来说，应称为分生组织培养。 取2-3㎝顶梢 2.4 茎尖培养 常用MS（双子叶）、B5和N6（单子叶）和White（生根）培养基，较高浓度的无机盐，对促进组织分化和愈伤组织生长是有利的。 可添加5%～10%椰乳，0.1～1.0mg/L的吲哚乙酸、萘乙酸、苄基腺嘌呤等，有的还需添加活性炭。 根据培养种类不同，添加的生长调节剂可适当调整。 2.5 继代培养生根和快速繁殖 将接种外植体置于25度左右、光照度3000lx的实验室中，光周期13-16h/d，培养2-3周成苗。苗高1-2cm高时，转入生根培养基，7-10天后生根，再继代成壮苗后移栽。 图7-1 葡萄茎尖脱毒培养过程示意图 葡萄茎尖脱毒经过7个时期：A―接种后变绿增大期；B―形成畸形叶期；C―形成多芽和芽伸长期；D―多芽展开小叶和小叶伸长期；E―发根期；F―根和茎伸长期；G―移栽入盆期 2.6 影响茎尖培养法脱除植物病毒的因素 母体材料病毒侵染的程度 外植体的生理状态 起始培养的茎尖大小 培养基及培养条件 茎尖培养脱毒效果的好坏与茎尖大小呈负相关，切取的茎尖越小，脱毒效果越好； 而培养茎尖成活率的高低则与茎尖大小呈正相关，切取茎尖越小，成活率越低。 一般剥离带1-2个叶原基的茎尖即可获得较好的脱毒效果。 茎尖越小对培养基的要求越高，成功率越低。一般生长素/细胞分裂素的比值大于1时有利于根的形成，否则有利于芽的分化。 康乃馨不同大小茎尖与康乃馨斑驳病毒的脱毒效果 茎尖大小(mm) 培养数 荆芥鉴定之病斑 总病斑 接种叶数 平均病斑数/叶 无病毒茎尖 数目 % 0.1 0.25 0.5 0.75 1.0 1.0 3 20 30 9 4 5 3 13 0.2 137 61 2.2 1198 70 17.1 429 12 35.3 432 11 39.2 1972 20 98.6 2 66 8 40 4 13 1 11 0 0 0 0 2.7 提高脱毒效果 2.7.1 物理处理 1）高温处理 2）低温处理 2.7.2 化学处理 1）高温处理又称温热疗法 某些病毒受热以后不稳定，失去活性。 把植物放在高于正常温度的环境中，组织内部的病毒受热后部分或全部钝化，使病毒在植物体内增殖减缓或停止，而失去侵染能力；但寄主植物的组织很少或不会受到伤害。 作为一种物理效应可以加速植物细胞的分裂，使植物细胞在与病毒繁殖的竞争中取胜。 热处理时间因植物而异 （1）温汤浸渍处理 适用于休眠器官、剪下的接穗或种植的材料，在50℃左右的温水中浸渍材料数分钟至数小时，方法简便易行但易致材料受伤。 （2）热风处理 将试验母株在高温室内或生长箱中生长一个阶段，使其顶端分生组织和次生分生组织迅速生长，然后切取其茎尖分生组织进行离体培养。对活跃生长的茎尖效果较好。 处理温度和时间因植物种类和器官生理状况而异。 培养温度（35℃ ~40℃） 光照强度（3000~10000Lx) 培养时间 短则几十分钟，长可达数月 例如康乃馨置于38℃两个月，草莓36℃ 6周，即可清除茎尖的病毒。 如马铃薯未脱毒小苗在生长箱中变温处理，35℃4h，31℃4h，交替1个月，其脱毒效果可达80%以上。 变温处理的优点：35℃使病毒钝化，31℃可提高小苗生活力，这样既提高脱毒率，又能提高成苗率。 热处理的局限性 （1）并非所有的病毒都对热处理敏感。热处理只对圆周形（苹果花叶病毒）、线状（马铃薯卷叶病毒）的病毒和类菌质体起作用。而对杆状病毒（千日红病毒）无效。 （2）延长热处理时间，病毒钝化效果好，同时也可能会钝化植物组织中的抗性因子而降低处理效果。 （3）热处理极易使植