检本16高效薄层色谱法.pptVIP

* 仪器分析—第16章 第一节 概 述 薄层色谱法(TLC)是将固定相均匀涂布在表面光滑的平板上形成薄层，而进行分离和分析的色谱方法。 A B 高效薄层色谱法(HPTLC)的薄板由厂家生产，使用更细的吸附剂制板，板层更薄更均匀、致密；点样、展开、测定实现仪器化操作。具有更高的分离效率和检出灵敏度。 A B 第二节 薄层色谱法的原理 分离机制：吸附色谱法、分配薄层法、… 固定相：吸附剂 移动相(展开剂)：混合有机溶剂 溶剂借助吸附剂的毛细管作用，载带被分离组分向前移动(展开) ，展开过程中，组分不断被吸附、解吸附、再吸附、再解吸附…， 一、薄层色谱法的原理 比移值(Rf)： 二、Rf 及分离度 Rf与组分性质、吸附剂、展开剂性质和展开条件等有关。 溶剂前沿 di dm 相对比移值 Rst可以大于1，也可以小于1。 Rf是定性参数 取值范围是0～1 可用范围是0.2～0.8 最佳范围是0.3～0.5 ? ? ? 1 2 3 1, 2 样品 3 标准品 薄层色谱的塔板数、塔板高度、分离度 2 1 d1 d2 dm P288-习题6 P288-习题7 P288-习题8 第三节 TLC 的固定相与流动相 一、固定相(吸附剂) 要求：纯度高、粒度小（10~40 um）、均匀 种类： 氧化铝：中性、碱性和酸性 硅胶 纤维素 聚酰胺 G—自含粘和剂(石膏) CMC—自含粘和剂(羧甲基纤维素) H—不含粘和剂 HF254—含荧光剂，254nm光照发绿光 HF365—含荧光剂，365nm光照发光 GF254—含粘和剂\荧光剂 硅胶的型号 常用的有： 环己烷二硫化碳苯四氯化碳二氯甲烷乙醚氯仿乙酸乙酯正丁醇丙酮乙醇甲醇水 二、流动相(展开剂/溶剂) 多用混合溶剂 三角形优化法 最佳范围是0.3～0.5 溶剂极性↑，展开能力↑，k↓， Rf↑ ，因此， 调节溶剂极性，可以控制组分的比移值。 吸附剂的选择：（选择合适的吸附力） 根据被测物极性与吸附剂的活性 被测物极性强—活性小的吸附剂 被测物极性弱—活性大的吸附剂 三、吸附剂与展开剂的选择原则 展开剂的选择： “相似相溶”原则 P288-习题2、5 铺板 →点样 → 展开 →显色定位(定性/定量) A B 第四节 TLC 的实验技术 操作可分四个步骤 一、铺板—薄层板的制备 软板—不加粘合剂，用干吸附剂铺成的薄层板 活化处理（高温去水） 定性分析—2×8cm 定量分析—10×20cm 硬板—吸附剂加粘合剂，用湿涂法铺成的薄层板 特点：简单、展开速度快、但不牢固、分离效果差 硅胶G—自含粘和剂 二、点样 1, 2 样品 3 标准品 ? ? ? 1.5-2.0cm 2.0cm 1 2 3 将试液滴加到薄层板上 方法：用平整的毛细管或微量注射器 浓度：0.1%~1%，几微升 时间：10mim，风吹干燥 位置： 展开就是让溶剂借助吸附剂的毛细管作用，载带被分离组分向前移动过程。 三、展开 展开方式有：上行展开 倾斜上行展开 下行展开 展开方法：在密闭的层析缸进行，层析缸内被溶剂蒸气预饱和(防止边缘效应) 前沿 ? ? ? 2.0cm 1 2 3 薄层板浸入展开剂深度0.5?1.0cm；展开至整板3/4距离，标记前沿。 紫外光照射法： HF254、GF254 、HF365 蒸气显色法： 碘、挥发性酸碱(HCl、HNO3、NH3H2O等) 喷洒显色法： 浓H2SO3、茚三酮、三氯化铁-铁氰化钾 生物自显影法 四、显色定位 2 1 在一块薄层板上，与标准品的Rf值对照定性。 在没有标准品的情况下，也可采用Rst定性。 ? ? ? 1 2 3 1, 2 样品 3 标准品 五、定性分析 洗脱法：将组分斑点全部取下，用适当的溶剂进行洗脱，再选用适当的方法(如紫外分光光度法、荧光分光光度法等)进行定量测定。 目视比色法：一种半定量分析方法 。 薄层扫描法：用薄层扫描仪对组分斑点进行扫描，直接测定斑点的含量。 六、定量分析