胶乳凝集法测定糖化血红蛋白及临床意义.docVIP

精品论文 参考文献 胶乳凝集法测定糖化血红蛋白及临床意义 田玉春 　　临洮县中医院 730500 　　摘要：目的：探讨胶乳凝集法测定糖化血红蛋白（HBA1c）及在临床中的应用价值，以便更好地服务于临床，帮助糖尿病患者控制血糖水平。方法：利用胶乳凝集反应法测定糖化血红蛋白，并对精密度，线性范围，准确度进行了分析，并检测100例健康人及80例糖尿病人。结果：健康人群HbA1c参考范围为5.0%plusmn;1.2%，糖尿病患者HbA1c均值为7.30%plusmn;2.3%，线性范围：1.8%---17.1%，准确度：相对偏差≦plusmn;15%，精确度：批内CV 2.5%---3.98%，批间CV3.77%---4.82%。结论：该法特异性好，精密度高，结果准确，收到了临床医生及糖尿病患者的好评。 　　关键词：糖化血红蛋白（HbA1c）；检测；临床意义 　　人体血液中红细胞内的血红蛋白与血糖结合的产物是糖化血红蛋白。血糖和血红蛋白的结合生成糖化血红蛋白是不可逆反应，并与血糖浓度成正比，且保持120天左右，所以可以观测到120天之前的血糖浓度。糖化血红蛋白测试通常可以反映患者近8─12周的血糖控制情况。笔者通过对80例标本的检测发现。这一指标检测收到广大临床医生及糖尿病患者的好评。 　　1材料与方法 　　1.1标本来源 2013年3月至6月来我院确诊的糖尿病患者共80例，男49例，女31例，年龄为45岁─76岁。2013年健康体检者100例，男65例，女35例，平均年龄45岁。 　　1.2 试剂及仪器准备材料 　　试剂由北京九强生物技术股份有限公司提供，仪器为东芝TBA—120全自动生化分析仪。 　　1.3 方法原理 　　同时检测糖化血红蛋白和总血红蛋白的浓度。糖化血红蛋白的结果用占总血红蛋白的%来表示。 　　总血红蛋白的检测 　　总血红蛋白试剂用于检测总血红蛋白。这个方法是应用Woll et al描述的方法，在去离子的碱性活性剂中使所有的血红蛋白转化为高铁血红蛋白，于600nm处用终点法进行检测。 　　糖化血红蛋白（HbA1c）的检测 　　基于胶乳凝集抑制的反应原理。凝集素由包括HbA1c 不同部分的多聚物组成，它可以与特异的鼠单克隆抗体包被的胶乳HbA1c试剂发生凝集反应。 　　标本中缺乏HbA1c，HbA1c R2中的凝集素与HbA1c R1中的HbA1c抗体发生凝集，使吸光度升高。标本中存在HbA1c，会降低凝集率，它与HbA1c 凝集素竞争性的于胶乳试剂中的抗体结合。所以吸光度的变化与HbA1c的浓度成反比。在700nm处检测吸光度的变化，利用标准曲线计算结果。凝集程度HbA1c的百分数的计算用g/dl HbA1c与总血红蛋白的比值计算。 　　2 测定方法 　　按试剂说明书利用胶乳凝集反应法测定并对精密度，线性范围，准确度进行了分析。 　　2.1标本要求 采用EDTA抗凝全血标本，10ul的全血与400ul血红蛋白变性剂混匀（1：41），避免起泡沫。室温下至少孵育5分钟。 　　2.2 方法步骤 　　2.2.1试剂 试剂R1（抗体试剂）、R2（凝集试剂）、R3（血红蛋白变性试剂），三种试剂开启后可直接使用。所有试剂2-8℃保存可稳定至效期。使用前半小时室温下混匀，试剂在生化分析仪中（10℃）稳定30天。 　　2.2.2测定参数 　　分析方法：终点法；校准方法：HPLC/Drabkin 反应方向：下降，测定温度：37℃。 　　2.2.3标准 　　检测总血红蛋白：推荐用生理盐水作为0点，检测总血红蛋白只需要HbA1c标准水平1。 　　检测HbA1c：需要1—6水平的标准。 　　HbA1c标准品参照HPLC方法，总血红蛋白标准品参照Drabkin方法。 　　2.2.4计算 　　%HbA1c=??（HbA1c/T.Hb）g/dl*100 　　3 结果 　　线性范围：1.8%-17.1% 准确度：相对偏差≦plusmn;15% 精确度：批内CV 2.5%～4.00%，批间 CV 3.77%～4.82%，与有关报道一致。健康人正常范围：3.8%～6.2%；80例糖尿病患者标本测定值范围为：5.0％～9.6%。 　　4 讨论 　　4.1 糖化血红蛋白在血液中含量过高会影响红细胞对氧的亲和力，使组织与细胞缺氧，并导致血脂和血粘度增高，进而诱发心脑血管病变。它还会引起肾小管基底膜增厚从而诱发肾病，使眼球晶体被糖化导致白内障，造成末梢循环障碍引起足部病变等。英国剑桥医学院研究显示，糖化血红蛋白每增加1个百分点，II型糖尿病患者合并心脑血管疾病的几率增加15%—18%，死亡率增加20%—30%. 　　4.2 HbA1c形成取决于血糖浓度与血红蛋白（Hb）接触时间 　　其次生成量与血中葡萄糖浓度成正比，其糖化过程缓慢且