基于多重PCR的主要食源性致病菌的快速检测.pdfVIP

上海农业学报 2015，31(4)：34—39 ActaAgriculturaeShanghai DOI：10．15955~．issnl000-3924．2015．04．07 文章编号：1000-3924(2015)04-034-06 基于多重 PCR的主要食源性致病菌的快速检测 胡瑞丽 ，~A-A-，吴洋洋 ，许 燕 ，赵 凯 ’外，索玉娟 ，邵 毅 ，周昌艳 ’ (上海师范大学 ，上海200234；上海市农业科学院生物技术研究所 ，上海201106； 上海市农业遗传育种重点实验室，上海 201106；上海市农业科学院农产品质量标准与检测技术研究所 ，上海201403； 上海科立特农产品检测技术服务有限公司，上海201403) 摘 要：根据单核增生李斯特菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌O157：H7的特异性序列分别设计 4 对特异性引物，建立了一种快速检测上述4种常见食源性致病菌的多重PCR方法，并对反应体系中的模板、引 物、rTaq酶、MgSO 添加量以及退火温度进行了优化。结果显示：4对引物序列的特异性均较好 ，利用单重PCR 对4种致病菌的灵敏度进行检测，其检测限均达到 10copies／mL。多重 PCR同时检测4种致病菌的灵敏度为 10copies／mL，对人工污染猪肉中的4种致病菌的灵敏度检测为 10cfu／mL。该检测方法不与其他菌产生交叉反 应 ，与传统方法相比大大缩短了检测时间，并提高了检测的准确度。 关键词 ：多重PCR；食源性致病菌；检测；食品安全 RapiddetectionoffoodbornepathogenicbacteriabasedonmultiplePCR HU Rui—li，REN Fang—fang ，WU Yang—yang ，XU Yan ，ZHAO Kai’” ， SUOYu-juan ，SHAOYi ，ZHOUChang．yan， (ShanghaiNormalUnive~ity，Shanghai200234，China；BiotechResearchInstitute，ShanghaiAcademyof AgriculturalSciences，Shanghai201106，China；ShanghaiKeyLaboratoryofAgriculturalGeneticsand Breeding，Shanghai201106，China；InstituteofAgro—FoodStandardand TestingTechnology，Shanghai AcademyofAgriculturalSciences，Shanghai201403，China；ShanghaiCo—EliteAgro—FoodTestingService Co．，Ltd．，Shanghai201403，Cina) Abstract：Accordingtothespecificsequenceof4commonofodbomepathogenicbacteria，Listeriamonocy— togenes，Salmonellaenterica，StaphylococcusaureusandEscherichiacoliO157：H7，4pairsofspecificprimerswere designedandamultiplePCRmethodforrapiddetectingtheabovebacteriawasestablished．Theadditiveamount oftemplate，primers，rTaq，MgSO4，andtheannealingtemperatureofthereactionsystem wereoptimized．There— suitsshowedthatthespecificityof4pairsofprimerswasbetter．Thesensitivityof4speciesofpathogenicbacteria wasdetectedbysinglePCR，andthedetectionlimitwas10copies／mL．T