离心沉淀集菌涂片与罗氏培养痰内结核分枝杆菌结果分析.docVIP

精品论文 参考文献 离心沉淀集菌涂片与罗氏培养痰内结核分枝杆菌结果分析 朱变仙 赵安所 黄文泰 朱秋玲（云南省龙陵县疾病预防控制中心 云南龙陵 678300） 【中图分类号】R446 【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2011）45-0239-02 【摘要】目的 通过离心沉淀集菌方法来提高痰液结核分枝杆菌的检出率。方法 采用快速离心沉淀集菌涂片法检测痰液抗酸杆菌，同时痰涂阳性者接种酸性罗氏培养基进行培养对照观察。结果 利用离心沉淀集菌方法可提高痰涂片和培养的阳性率。结论 此方法操作简便、快速、敏感，其阳性检出率高，便于其他实验室借鉴与改进推广运用。 【关键词】结核分枝杆菌 离心沉淀集菌 痰涂片 培养 结核杆菌是一类生长缓慢具有抗酸性的细菌，一般不易培养，目前从痰中检测结核分枝杆菌仍是诊断肺结核的重要方法。本文对1647例肺结核患者及疑似患者痰标本进行快速离心浓缩集菌涂片抗酸染色法和酸性罗氏培养法结果进行分析，以求探讨影响痰涂片和培养结果的各种因素，提高痰涂片和培养的阳性率，为今后结核病实验室提供更实用而科学的检测方法。 1 材料与方法 1.1标本来源 2008—2010年在龙陵县疾病预防控制中心拟诊的1647例结核病患者，其中痰涂片阳性337例，随机抽取痰涂片镜检阳性结果在(1—4＋) 的59例患者留取夜间痰、晨痰各1份，共118份进行结核分枝杆菌分离培养，其中初诊患者47例94份，随访复诊患者12例24份。 1.2试剂和培基 试剂和酸性罗氏培养基由云南省结核病参比实验室提供。 1.3检验方法 取肺结核患者的痰标本1-5ml作快速沉淀集菌凉片和罗氏结核分枝杆菌培养。 1.3.1快速离心沉淀集菌法 将痰液与溶痰剂（贝索）按1﹕3的比例加入，充分混匀使痰液完全消化后取5—8ml于试管内，3000r/min离心15min，弃上清，留沉淀液约0.1—0.15ml,将沉淀物混匀后吸取0.05—0.1ml于玻片正面右则2/3中央处涂片呈10mmtimes;20mm左右的椭圆形，待自然干燥后，火陷固定，抗酸染色镜检阳性者，再做结核分枝杆菌培养。 1.3.2结果判断 患者留取的标本中，只要其中1份在300个视野镜检ge;2条以上时，即判定该患者为阳性病例。 1.3.3酸性罗氏培养法 取患者痰液1—2ml置前处理管中，视标本性状加入1—2倍体积的4%NaOH，涡旋震荡30—60mim,至标本完全液化后室温静置15min，弃除培养基多余的凝固水，用无菌吸管取经处理后痰液标本0.1ml接种于培养基斜面上，使菌液均匀铺满斜面，每份标本接种2支培养管，接种好后斜面向上在37℃恒温培养箱内水平放置24h后直立，继续培养8周。 1.3.4结果观察 第3d和第7d各观察一次菌落生长情况，以后每周观察一次至满8周，只要一支培养管长菌发现疑似分枝杆菌生长的为阳性，阳性者将培养基直立放置4℃冰箱保存备检；如8周后同一病人4管均未见菌落生长的报告结核分枝菌落培养阴性；出现显著污染以至无法观察的，记录“污染”。污染后的培养管经121℃高压灭菌30min按生物安全医疗废物处理。 2 结果 2.1痰涂片镜检两种方法在初诊患者标本中检测结果 直接涂片镜检阳性69份,阳性率为20.47%(69/337); 采用离心沉淀集菌法涂阳率为93.22%(55/59),两者有显著性差异(x2＝9.16，P＜0.01)。 2.2痰涂片镜检与结核分枝杆菌培养结果 在痰涂片阳性(1—4＋)随机抽取患者痰标本59例118份共培养236管，有55例110份220管长菌，培养阳性率为93.22%（220/236），其中初治病例47例，长菌46例，长菌阳性率达97.87%；复治病例12例，长菌9例，长菌率为75%。 2.3痰涂片阳性与培养长菌情况 痰涂片阳性在1＋的培养长菌率在66.67%、2＋的在91.67%、3＋的在95.12%、4＋的在94.32%。涂片镜检阳性菌数ge;2＋以上的长菌率比1＋的阳性长菌率较为理想。涂片培养shy;阳性55例，涂片与培养阳性符合率为93.2%。 2.4长菌情况 晨痰培养较夜痰长菌率高,且干酪样、褐色血痰、脓痰培养长菌率较粘液和泡沫痰培养长菌率要好，初治病例标本菌落生长较复治病例理想，初治病例痰标本一般培养8周后多数菌落生长良好可达4＋以上，而复治病例培养8周后，虽然有菌落生长，但多数只是几个菌落或单个菌落生长，很少达到4＋以上。 3 讨论 3.