山鸡椒lcgpps表达模式及其与lcggpps蛋白互作分析.pdfVIP

林业科学研究　２０１７，３０（６）：１０５０ １０５８ ＦｏｒｅｓｔＲｅｓｅａｒｃｈ 　　ＤＯＩ：１０．１３２７５／ｊ．ｃｎｋｉ．ｌｙｋｘｙｊ．２０１７．０６．０２４ 山鸡椒ＬｃＧＰＰＳ表达模式及其与ＬｃＧＧＰＰＳ蛋白互作分析 １ １ １ ２ １ 曹　佩 ，陈益存 ，高　暝 ，郭浩波 ，汪阳东 （１．中国林业科学研究院亚热带林业研究所，浙江 杭州　３１１４００；２．美国田纳西大学生物化学系，田纳西州 诺克斯维尔ＴＮ　３７９９６） 摘要：［目的］鉴定与山鸡椒精油合成关键酶香叶基二磷酸合酶（ＬｃＧＰＰＳ）的互作蛋白，为揭示山鸡椒精油主要成分 单萜物质的合成机理奠定基础。［方法］通过本地 Ｂｌａｓｔ有哪些信誉好的足球投注网站山鸡椒果实转录组数据库，采用 ＲＴＰＣＲ克隆山鸡椒 ＧＰＰＳ基因（编码异质 ＧＰＰＳ小亚基的ＬｃＧＰＰＳ．ＳＳＵ１）和山鸡椒 ＧＧＰＰＳ基因（ＬｃＧＧＰＰＳ１和ＬｃＧＧＰＰＳ３）；利用 ｑＲＴ ＰＣＲ分析其组织特异性表达模式，通过蛋白互作预测和酵母双杂实验验证ＬｃＧＰＰＳ．ＳＳＵ１分别与ＬｃＧＧＰＰＳ１和ＬｃＧＧ ＰＰＳ３的互作关系。［结果］克隆得到ＬｃＧＰＰＳ．ＳＳＵ１、ＬｃＧＧＰＰＳ１和ＬｃＧＧＰＰＳ３３条基因序列，基因表达模式分析表明， ＬｃＧＰＰＳ．ＳＳＵ１特异性地在花和果实中高水平表达；蛋白结构互作预测结果显示，ＬｃＧＰＰＳ．ＳＳＵ１可以分别与ＬｃＧＧ ＰＰＳ１和ＬｃＧＧＰＰＳ３互作形成异质二聚体；经过酵母双杂交实验验证发现，仅 ＬｃＧＧＰＰＳ３能与ＬｃＧＰＰＳ．ＳＳＵ１发生互 作。［结论］ＬｃＧＰＰＳ．ＳＳＵ１通过与ＬｃＧＧＰＰＳ３蛋白发生互作从而在山鸡椒萜类合成途径中发挥作用，为深入研究山 鸡椒萜类合成机制提供参考。 关键词：山鸡椒；萜类合成；ＧＰＰＳ；ＧＧＰＰＳ；异质二聚体；蛋白互作；表达模式 中图分类号：Ｓ７１８．４６ 文献标识码：Ａ　　　文章编号：１００１１４９８（２０１７）０６１０５００９ ＧｅｎｅＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎＰａｔｔｅｒｎｏｆＬｃＧＰＰＳａｎｄＩｔｓＩｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｗｉｔｈ ＬｃＧＧＰＰＳｓｉｎＬｉｔｓｅａｃｕｂｅｂａ １ １ １ ２ １ ＣＡＯＰｅｉ，ＣＨＥＮＹｉｃｕｎ，ＧＡＯＭｉｎｇ，ＧＵＯＨａｏｂｏ，ＷＡＮＧＹａｎｇｄｏｎｇ （１．ＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＳｕｂｔｒｏｐｉｃａｌＦｏｒｅｓｔｒｙ，ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＦｏｒｅｓｔｒｙ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ　３１１４００，Ｚｈｅｊｉａｎｇ，Ｃｈｉｎａ； ２．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｎｎｅｓｓｅｅ，ＫｎｏｘｖｉｌｌｅＴＮ　３７９９６，Ｔｅｎｎｅｓｓｅｅ，ＵＳＡ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：［Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ］Ｔｏｉｄｅｎｔｉｆｙｔｈｅｉｎｔｅｒａｃｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｓｏｆｇｅｒａｎｙｌｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅｓｙｎｔｈａｓｅ（ＧＰＰＳ）ａｎｄｐｒｏｖｉｄｅｔｈｅ ｏｒｅｔｉｃａｌｂａｓｅｓｆｏｒｉｌｌｕｍｉｎａｔｉｎｇｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｍｏｎｏｔｅｒｐｅｎｅｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓｉｎＬｉｔｓｅａｃｕｂｅｂａ．［Ｍｅｔｈｏｄ］Ｔｈｅｔｒａｎ ｓｃｒｉｐｔｏｍｅｄａｔａｂａｓｅｏｆｆｒｕｉｔｓｏｆＬ．ｃｕｂｅｂａｗａｓｓｅａｒｃｈｅｄｂｙｂａｓｉｃｂｌａｓｔｔｏｏｌ．ＲＴＰＣＲｗａｓｕｓｅｄｔｏｃｌｏｎｅＧＰＰＳｇｅｎｅｓ （ＬｃＧＰＰＳ．ＳＳＵ１ｅｎｃｏｄｉｎｇｔｈｅｓｍａｌｌｓｕｂｕｎｉｔｏｆｈｅｔｅｒｏｍｅｒｉｃＧＰＰＳ）ａｎｄＧＧＰＰＳｇｅｎｅｓ（ＬｃＧＧＰＰＳ１ａｎｄＬｃＧＧＰＰＳ３）． ｑＲＴＰＣＲｗａｓｃｏｎｄｕｃｔｅｄｔｏａｎａｌｙｚｅｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐａｔｔｅｒｎｓ．Ｉｎａｄｄｉｔｉｏｎ，ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎｏｆｔｈｒｅｅｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｍｏｄｅｌｓａｎｄｙｅａｓｔｔｗｏｈｙｂｒｉｄｓｙｓｔｅｍ