菲律宾蛤仔Ruditapes philippinarum抑菌酶解物的制备与作用机理研讨.pdfVIP

要 本文以菲律宾蛤仔为研究对象，筛选有抑菌活性的酶解物，i：优化其酶解：【：艺； 4-JLS．q!。研 对酶解物进行初步的分级纯化，爿二研究j11】茵活。肚影响l列索、探讨其作JIJ 究结果如下： l、菲律宾蛤仔胃蛋白酶酶解产物时命黄色衙苘球荫、人肠杆1菊、枯草芽孢 杆菌、酿酒酵母和副溶血弧菌均有一定的抑菌活性，其中对会’黄色葡萄球蔺和枯 草芽孢杆菌的抑菌活性最强，对17U联微球菌则无明届的#lJi辅活性。最优酶解-丁：艺 2，加酶!g-R-J．3000U，料水比l：4。 条件为：酶解时fnj2h，温度35℃，pH 2、菲律宾蛤仔抑倚活性酶解物1·|=l对分了质键：卜婴分们祚5000D以下。川对 分子质量4,q：1000Dn勺纰分占27．31％，I：n×．f分jJ乞质邋住1000～3000D之川的组 量大于5000D的组分仅占1．91％。非律宾蛤仔抑菌活性酶解物经超滤杯分级后得 到3个组分：组分I(3KDMr5KD)，纽分lI(1 lKD)：其中，组分ll对会黄色俪萄球1商的扣q],ljIJfl,tlJ山童强，其次是i11．分lII(Mr 碱性环境均会降低组分II对会黄色葡．辐球菌!I三长的抑制能力；而紫外线处列!埘组 分lI的抑菌活性没有影响。 3、菲律宾蛤仔抑菌酶解物组分lI使余黄色葡萄菌和枯：革芽孢杆菌的菌落形 态发生变化，在对数生长期抑制2种菌的的菌体分裂。研究发现2种细菌培养液 中蛋白、可溶性糖和紫外吸收物质的含量增加，液电导率升高，还可以检测到碱 性磷酸酶、13一半乳糖苷酶的活性，且2种细菌的磷代谢均受到严重阻碍。扫拙 电镜结果显示：随着菲律宾蛤仔抑菌酶解物组分II作H．】时问的延长，金黄色葡萄 球菌菌体细胞蒯发生结团现象，形j状变得不规则，大量细胞粘连在一起，随后大 量胞内物质外溢，细胞问的界限完全丧失，几乎融合为一个整体：枯草芽孢杆菌 菌体细胞表面变得；}H糙，细胞丌始粘连，lldfnJ界限变得模糊不清，随后出现破损 现象，处理9h后大量胞内物质外泄，仅能从残存菌体碎片辨别出小部分菌体大 概形念，大部分菌体已裂解死亡。透射电镜结果显示：随着菲律宾蛤仔抑荫酶解 物组分II作用时倒的延长，会黄色葡萄球菌菌体表面变得机糙，细胞质分自i不均 匀，固缩较严重，中问有颜色较深的团状物质出现，随后大量胞内物质外泄，处理 9h后大量菌体裂解死亡；枯草芽孢杆菌菌体细胞丌始皱缩，细胞质不均匀分布， 开始出现质壁分离现象，随后细胞壁破裂明显，大量胞内物质外泄，仅可以看到 残留的模糊核质区，细胞裂解死亡。SDS．PAGE图谱显示，盒黄色葡萄球菌和枯 草芽孢杆菌80KD和25KD这两个分子量段的蛋白谱带随着菲律宾蛤仔抑菌酶解 物组分lI作用时间的延长而逐渐变浅，而其它分子量段的蛋白谱带逐渐消失。因 此，可以推测菲律宾蛤仔抑菌酶解物组分II的作用机理可能是破坏了菌体细胞壁 和细胞膜，改变了菌体细胞的通透性，导致大量胞内物质外泄，并进入菌体细胞 内部影响其iF．常的生理代谢，从而引起菌体裂解死I：：。 关键词：谁律宾蛤仔：酶解物：抑菌活·Itl-：抑菌机理 洲Y…2吣0㈣8川7删7㈣3Ⅲ4 of from was Theantibacterial activity Ruditapesphilippinarum hydrolysates screenedandthe conditionwas hydrolysis optimized factors itsantibacterial and affecting activity preliminarypurification，