肺炎衣原体感染通过P13K激活Racl而诱导血管平滑肌细胞迁移研究.pdfVIP

· 236 · 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2013，29(2)：236-241 [文章编号] 1000—4718(2013)02—0236—06 肺炎衣原体感染通过 PI3K激活 Racl 而诱导血管平滑肌细胞迁移 张俊霞， 张腾腾， 张利军， 王蓓蓓，魏俊燕， 王海伟， 沈炳玲， 张丽著 (天津医科大学基础医学院病理生理学教研室，天津 300070) [摘 要] 目的：研究Racl活化在肺炎衣原体(epn)感染诱导血管平滑肌细胞 (VSMCs)迁移中的作用及磷 脂酰肌醇3．激酶(PI3K)对其活化的影响。方法：谷胱甘肽巯基转移酶(GST)一p2l活化激酶 1p21结合结构域 (PBD)即 GST—PBD重组质粒转化感受态细菌，诱导融合蛋 白表达并纯化；GST．pulldown实验检测 C．pn感染 VSMCs后 Racl活性的变化；PI3K特异性抑制剂 LY294002(25I~mol／L)预处理 VSMCs，GST—pulldown实验检测 Rac1活性的变化；Rac1特异性抑制剂 NSC23766(50~mol／L)预处理VSMCs，wound—healing实验和Transwell实验观 察 VSMCs迁移能力的变化。结果：重组质粒转化感受态细菌后，经诱导表达和纯化，得到足量有效的GST．PBD融 合蛋白；GST．pulldown实验结果显示，c 感染 VSMCs后 Racl活性增强且显著高于正常对照组 (P0．05)； LY294002预处理 VSMC后 ，ep感染诱导的Racl活性明显下降(P0．05)；细胞迁移实验结果显示，NSC23766预 处理的 epn感染组细胞迁移能力明显低于单纯感染组(P0．05)。结论 ：C．pn感染可能通过 PI3K激活Racl，从 而诱导VSMCs迁移。 [关键词] 肺炎衣原体 ；Rac1GTP结合蛋白；磷脂酰肌醇3一激酶；血管平滑肌细胞 ；细胞迁移 [中图分类号] R363 [文献标志码] A dot：10．3969／j．issn．1000—4718．2013．02．009 ChlamydiapneumoniaeinfectiOilinducesvascularsmoothmusclecellmi． gration through stimulatingRaclactivityviaPI3K activation ZHANGJun—xia，ZHANGTeng—teng，ZHANGLi-jun，WANGBet—bet，WEIJun—yan， WANGHat—wet。SHENBing—ling，ZHANGLi-jun (DepartmentofPathophysiology，BasicMedicalCollege，TianjinMedicalUniversity，Tianjin300070，China．E—mail：li— junwz@hotmail．tom) [ABSTRACT] AIM：TodeterminetheroleofRac1activationinthemigrationofvascularsmoothmusclecells (VSMCs)inducedbyChlamydiapneumoniae(epn)infectionandtoinvestigatetheeffectofphosphatidylinositol3-kinase (PI3K)onRaclactivationduringtheprocess．METHODS：TherecombinantplasmidencodingglutathioneS—transferase (GST)一p21一bindingdomainofp21一activatedkinase1(PBD)fusionproteinwastransfomredintothecompetentbacteriato inducetheexpressionofthefusionprotein．Thefusion