融合蛋白CRGDH固定化及不对称还原制备S-氯-化工进展.PDFVIP

化 工 进 展 2015 年第 34 卷第 11 期 CHEMICAL INDUSTRY AND ENGINEERING PROGRESS ·4047 · 研究开发 融合蛋白 CR2-GDH 固定化及不对称还原制备(S)-4-氯-3- 羟基丁酸乙酯 王爽，穆晓清，聂尧，张荣珍，徐岩 （江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室，江苏无锡 214122 ） 摘要：比较介孔分子筛材料 SBA-15、MCM-41 、海藻酸钙、改性二氧化硅4 种载体固定化融合蛋白 CR2-GDH 其酶固载量和酶活回收率，选择SBA-15 为固定化载体。研究固定化条件对固定化融合酶量的影响以及固定化酶 的稳定性，固定化酶在双相体系催化不对称还原反应。结果表明，在pH 值为5.5、酶浓度为1.4mg/mL、反应1h 条件下，固定化酶量为27.7mg/g 。加入25mmol/L 的Ca2+ ，固定化酶的酶活回收率由58.6%提高到78.1% 。与游 离酶相比，固定化酶的热稳定性显著提高，40 ℃条件下酶活回收率提高19.1%。固定化酶水相中反复使用7 批次 后，剩余活性仍超过 30%，具有较好的操作稳定性。与游离酶相比，固定化酶更耐受烷烃类有机溶剂。在水/有 机溶剂双相反应体系中，Ca2+/SBA-15 固定化酶和游离酶催化相比，产物得率提高23.8% 。 关键词：融合蛋白；SBA-15 ；固定化；双相体系；不对称还原 中图分类号：Q 814.2 文献标志码：A 文章编号：1000 –6613 （2015 ）11 –4047 –07 DOI ：10.16085/j.issn.1000-6613.2015.11.036 Immobilization of fusion enzyme CR2-GDH and bioreduction of ethyl (S)-4-chloro-3-hydroxybutyrate WANG Shuang，MU Xiaoqing ，NIE Yao ，ZHANG Rongzhen ，XU Yan （The Key Laboratory of Industrial Biotechnology，Ministry of Education ，School of Biotechnology，Jiangnan University ，Wuxi 214122 ，Jiangsu ，China ） Abstract ：Mesoporous molecular sieves SBA-15 was the best one among 4 kinds of carriers in terms of both carrier content and recovery of enzyme activity. The remaining carriers were MCM-41 ，modified silica，and calcium alginate. Immobilization of fusion enzyme CR2-GDH on SBA-15 was realized，and effect of immobilization conditions on immobilization content and activity ， stabilization of immobilized enzyme ，asymmetric reduction in biphasic system was investigated. The results showed that adsorption capacity was 27.7mg/g carrier under the condition