一种高效提取DNA的方法.pdfVIP

Mycosystema 菌 物 学 报 15 March 2009, 28(2): 299-302 jwxt@ ISSN1672-6472 CN11-5180Q ©2009 Institute of Microbiology, CAS, all rights reserved. 一种高效提取真菌总DNA的方法 1,2 1 2* 孙立夫 张艳华 裴克全 1 绍兴文理学院生命科学学院 绍兴 312000 2 中国科学院植物研究所植被与环境变化重点实验室 北京 100093 A rapid extraction of genomic DNA from fungi SUN Li-Fu1, 2 ZHANG Yan-Hua1 PEI Ke-Quan2* 1Life Science Faculty, Shaoxing College of Arts Sciences, Shaoxing 312000, China 2 Key Laboratory of Vegetation and Environmental Change, Institute of Botany, The Chinese Academy of Sciences, Beijing 100093, China 在真菌的分子生物学研究中，快速高效地提取 2002 ）；还有用一定频段的微波来处理辅助破壁的 质量优良的DNA有着重要意义。目前使用的真菌 （Sachin et al. 2003 ）。但以上这些方法有一定的缺 DNA提取方法步骤大体相似，主要差别在于采用何 点：一是液氮容易冻伤皮肤，一些地方液氮和干冰 种方法来打破细胞壁这一关键环节。常用的破壁方 不容易获得而受到限制；二是费时，效率不高，得 法主要有冷冻干燥研磨法、玻璃珠机械破壁法、酶 物容易损失；三是所用设备和药品相对较多。 解法和氯化苄法等（吴志红 2001 ）。通常冷冻干燥 本文所介绍的从真菌菌丝或菌肉中提取总 研磨法多用液氮来处理，一般是直接在液氮中研磨 DNA 的方法，则是用带有无菌塑料钻头的手电钻来 （Specht et al. 1982；Garber Yoder 1983 ；Mőller et 研磨提取对象以打破细胞壁，比Cenis （1992）所用 al. 1992 ；韩利刚等 1999 ；Al-Samarrai Schmid 的破壁方法更简洁高效，易于操作。此方法有如下 2000 ；刘少华等 2005 ；杨月梅等 2007 ）；玻璃珠 优点：（1）避免了使用液氮，便于不易获得液氮的 机械破壁法则加入硅胶、石英砂、玻璃珠等来帮助 地方使用；（2 ）省时省力，经济高效，所用药品和 破壁（秦振宇等 2000 ；易润华等 2003 ；周小玲等 设备相对较少，无需加入其他帮助破壁的物质；（3 ） 2004 ；Faggi et al. 2005；张桂敏等 2006 ）；酶解法 研磨充分，得物损失很少；（4 ） 提取的DNA质量好。 和氯化苄法是利用酶、氯化苄、尿素来溶解细胞壁 1 材料与方法 的（Pfeifer Khachatourians 1993 ；李