氯嘧磺隆对土壤真菌群落的影响.docVIP

精品论文 参考文献 氯嘧磺隆对土壤真菌群落的影响 代英杰 李万龙 任守振 张海君 相 磊（东北农业大学 资源与环境学院，黑龙江 哈尔滨 150030） 摘 要：本文以氯嘧磺隆为唯一碳源，从多年施用氯嘧磺隆的土壤中经富集和分离纯化获得了8株氯嘧磺隆降解菌。采用玉米主根生长抑制率的生物测定法，对8株菌的氯嘧磺隆降解率进行测定，8株菌中除A-2-1和A-3外，其它6株菌4d内对10 mgmiddot;L-1氯嘧磺隆的降解率均在60%以上。其中有4株菌的降解率达到了90%以上，它们分别是A-1、B-2、B-3和B-4，而最终筛选出1株氯嘧磺隆高效降解放线菌B-4，其氯嘧磺隆降解率可达97.2%。 关键词：氯嘧磺隆；氯嘧磺隆降解菌；分离筛选 引言 氯嘧磺隆在植物体内主要从处理部位（根和幼芽）向上传导，至生长点发挥作用。阻止植物体内乙酰乳酸合成酶（ALS）的活性而中断缬氨酸和异亮氨酸合成[1]。是一种选择性芽前、芽后除草剂，主要用于大豆田防除阔叶杂草。属于磺酰脲类除草剂。作用机制为抑制植物体内乙酰乳酸合成酶的活性而干扰支链氨基酸的合成。主要用于大豆除草，防除莎草、阔叶杂草及某些禾本科杂草[2]。氯嘧磺隆在土壤中残效期长，属长残效除草剂。长残效除草剂连续多年使用可能在土壤中持续积累，在连作或轮作农田中造成后茬敏感作物的减产或绝产，影响农业种植结构的调整及土壤资源的可持续利用。明确氯嘧磺隆对土壤微生态的影响，解决其残留药害问题，具有十分重要的理论和现实意义。由于残留期长，其土壤残留不仅对后茬敏感作物造成严重药害，导致作物减产或绝产，而且还可能对土壤环境造成污染。随着生物技术的迅猛发展，应用微生物进行生物修复已成为环境修复的一个重要内容[3]。因此，该研究拟从长期施用氯嘧磺隆的土壤中分离筛选出高效降解氯嘧磺隆的菌株，为开发生物治理氯嘧磺隆残留微生物菌剂及进行生物修复奠定基础。 1 材料与方法 1.1 供试材料 1.1.1 土壤样品。 黑龙江省嫩江县大豆田间多年施用氯嘧磺隆的土壤，经粉碎，过筛。 1.1.2 培养基。 富集培养基：蛋白胨0.5g，磷酸二氢钾0.1g，硫酸镁0.05g，蒸馏水100mL。 牛肉膏蛋白胨培养基（用于细菌分离）：牛肉膏0.3g，蛋白胨0.5g，氯化钠0.5g，琼脂2g，蒸馏水100mL。 马丁氏培养基（用于真菌分离）：蛋白胨0.5g，葡萄糖1g，磷酸二氢钾0.1g，硫酸镁0.05g，琼脂2g，蒸馏水100mL，加1%孟加拉红水溶液0.33mL，临用时每100mL培养基中加1%链霉素0.3mL。 改良高氏一号培养基（用于放线菌分离）：硝酸钾0.1g，磷酸氢二钾0.05g，硫酸镁0.05 g，氯化钠0.05g，硫酸亚铁0.001g，可溶性淀粉2g，琼脂2g，蒸馏水100mL。 PDA培养基：马铃薯20g，蔗糖2g，琼脂2g，水100mL。 1.1.3 试验器材。 恒温培养箱、人工气候箱、超净工作台、高压蒸汽灭菌锅、电子分析天平、光学显微镜等。 1.2 试验方法 1.2.1 降解菌的富集。 取田间多年施用氯嘧磺隆的土壤样品10g，溶解于90mL灭菌的生理盐水中，制得土壤悬浊液。在250mL三角瓶中，加入100mL富集培养基（含氯嘧磺隆的浓度为100mgmiddot;L-1），按10%的接种量接种土壤悬液，于28℃，120rmiddot;min-1的摇床培养5d，将培养液按10%接种量接种于氯嘧磺隆浓度为200mgmiddot;L-1的新鲜富集培养基中，然后于28℃，120rmiddot;min-1摇瓶培养5d，依次类推10次接种，按氯嘧磺隆100mgmiddot;L-1的浓度梯度增长，使最终富集培养液的氯嘧磺隆的浓度达到1000mgmiddot;L-1，得到富集降解菌株培养物种子。 1.2.2 降解菌的分离纯化。 降解菌富集过程中，每2次转接后，将菌悬液进行逐级梯度稀释。取0.15~0.2mL适当稀释梯度的样品溶液分别涂布于牛肉膏蛋白胨培养基、马丁氏培养基和改良高氏一号培养基平板。于28℃培养2d，挑取单一菌落划线培养于分离平板，并通过反复平板划线并结合菌落形态和显微镜观察菌体形态进行分离纯化，直至获得纯菌株。然后将纯菌株分别接种于牛肉膏蛋白胨、PDA和改良高氏一号斜面保存培养基中，于28℃下恒温培养2d后，放入4℃冰箱保藏备用。 2 结果与讨论 2.1 菌株的分离纯化