检测特异性抗原致敏的DC-CIK细胞对恶性肿瘤细胞的杀伤效应分析.docVIP

精品论文 参考文献 检测特异性抗原致敏的DC-CIK细胞对恶性肿瘤细胞的杀伤效应分析 （中国人民解放军第三五九医院 江苏 镇江 212002） 【摘 要】目的：分析特异性抗原致敏的DC-CIK细胞对恶性肿瘤细胞的杀伤效应。方法：以健康人外周血单个核细胞引出三种抗原致敏细胞，分别是LAK、DC和CIK，用A549肺癌细胞抗击DC,并将DC放在显微镜下进行观察，检测DC在两种状态下的表型变化，一种是DC经恶性肿瘤抗原冲击后的表型变化，另一种是DC未经恶性肿瘤抗原冲击后的表型变化。本次实验中靶细胞为恶性肿瘤原代细胞，效应细胞分为四组：分别为CIK、LAK 、DC-CIK和 DC-LAK细胞，在效靶比为50∶1、20∶1、10∶1时进行杀伤实验，测定杀伤活性的方法为LDH释放法，其中，细胞因子分别为IL-2、IL-12、IFN-gamma;，检测细胞因子分泌水平的方法为ELISA法。结果：在显微镜下观察DC经恶性肿瘤抗原后的表型，呈成熟形态，而LAK 细胞 、CIK 细胞和 DC-LAK细胞对恶性肿瘤原代细胞的杀伤效果都不及DC-CIK细胞（Plt;0.05）；DC-CIK细胞对恶性肿瘤细胞的杀伤效应与效靶比有着直接的关联，效靶比如果降低，DC-CIK细胞对恶性肿瘤细胞的杀伤效应也会随之减小（Plt;0.05);在杀伤实验中CIK、LAK 和 DC-LAK细胞组中的IFN-gamma;、IL-12分泌水平明显低于DC-CIK细胞组，而DC-LAK细胞组中 IL-2的分泌水平最高，DC-LAK和 LAK 细胞组明显高于其它 2 组(Plt;0.05) 。结论：抗原致敏的 DC 可引诱特异性 CIK 细胞,从而提高 CIK 细胞对恶性肿瘤原代细胞的杀伤效应, 而IFN-gamma;、IL-12的分泌水平与CIK 细胞对恶性肿瘤原代细胞的杀伤效应也有关系。 【关键词】抗原致敏；DC-CIK细胞；恶性肿瘤原代细胞；细胞因子；杀伤效应 【中图分类号】R730.23 【文献标识码】A 【文章编号】1004-6194（2015）02-0412-01 目前，恶性肿瘤的治疗效果在临床中还是不够理想，因此，临床中更多的使用过继免疫疗法作为治疗恶性肿瘤的辅助方法。CIK是以细胞因子为诱导，具有较强的增值效应和杀伤效应，可以限制MHC，而DC具有较强的抗原致敏效果，能够有效激发T细胞[3] 。如果将树突状细胞DC和CIK细胞分开治疗恶性肿瘤，效果都不是很理想，本次实验通过将特异性抗原致敏的DC细胞与CIK细胞联合起来分析对恶性肿瘤细胞的杀伤效应。 1 资料与方法 1.1一般资料 选取三种抗原致敏细胞，分别是LAK、DC和CIK，用A549肺癌细胞抗击DC,并将DC放在显微镜下进行观察，检测DC经恶性肿瘤抗原冲击后和未经恶性肿瘤抗原冲击后的表型变化。LAK、DC和CIK三种细胞都对恶性肿瘤细胞有杀伤效应，具有可比性。 1.2实验方法 将DC细胞与LAK和CIK共培养，组成四种效应细胞，分别为：CIK、LAK、DC-CIK和DC-LAK 细胞，在效靶比为50∶1、20∶1、10∶1时进行杀伤实验，分析CIK、LAK、DC-CIK和DC-LAK 细胞对恶性肿瘤原代细胞的杀伤活性，并检测细胞因子IL-2、IL-12、IFN-gamma;的分泌水平。 1.3统计学方法 对上述四组细胞中表型变化和杀伤效应进行分类总结，采取统计学软件SPSS19.0进行检测，所有结果均用（xplusmn;s）表示，P＜0.05，表明有显著性差异，具有统计的意义。 2 结果 3 讨论 治疗恶性肿瘤的有效途径之一是建立免疫应答，而 LAK 细胞、TIL 细胞和 CIK 细胞等都属于免疫活性细胞，可用于治疗恶性肿瘤胞。其中，TIL 细胞对恶性肿瘤具有杀伤的作用，杀伤活性大于LAK细胞，另外，TIL 细胞也可限制MHC，即使这样，TIL的细胞功能也很难改变，从而获得较少的细胞数，所以，在临床治疗中TIL细胞对恶性肿瘤的杀伤效果并不是很理想[2] 。而LAK细胞在临床推广中也具有较强的限制性，原因有两点：（1）LAK细胞的体外扩增能力不高；（2）LAK细胞对恶性肿瘤的杀伤作用不大。与TIL细胞和LAK细胞相比，CIK细胞的体外扩增能力较高，杀伤作用也比较强，所以在临床中值得推广。 目前，CIK细胞抗恶性肿瘤的机制还有待完善，但是如果能利用淋巴细胞的功能将CIK细胞的结构激活，一定会对恶性肿瘤细胞带来良好的杀伤效应。本次实验中，CLK细胞的杀伤率为40.59%，而常规细胞的杀伤率为20.12%，在临床上，CIK细胞已经运用到很多重大病症中的研究，比如白血病、肝癌、肾肿