免疫比浊法和免疫荧光定量法测定D.docVIP

免疫比浊法和免疫荧光定量法测定D 【摘 要】探讨免疫比浊法和免疫荧光定量法测定d-二聚体的可行性以及在临床的应用价值。 在stago血凝分析仪上采用免疫比浊法测定d-二聚体，在美国博适triage检测仪上采用免疫荧光定量法测定d-二聚体，对两种不同方法测定d-二聚体进行比较。试验数据表明：免疫比浊法测定d-二聚体的重复性好于免疫荧光定量法；两种方法测定d-二聚体在线性范围、灵敏度、抗干扰能力接近，试剂稳定性均能保存一年；美国博适triage检测仪的免疫荧光定量法使用方便，是一种准确、简捷的测定方法，适用于临床的急诊心肺功能五联检验；stago血凝分析仪的免疫比浊法定量检测d-二聚体含量方便、快捷，敏感性高，易在大多数医院普遍推广 【关键词】二聚体；血栓形成；免疫荧光定量法 【中图分类号】r446 【文献标识码】a 【文章编号】1004—7484（2013）10—0074—02 d-二聚体（d-dimer，d-d） 是纤维蛋白单体经活化因子xiii交联后，再经纤溶酶水解所产生的一种特异性降解产物，是一个特异性的纤溶过程标记物。只要机体血管内有活化的血栓形成及纤维溶解活动，d-二聚体就会升高。其对静脉血栓形成高度敏感，在排除静脉血栓形成的诊断中具有极其重要的价值。另外，d-d在心血管疾病、dic、恶性肿瘤等疾病也有明显变化，足反映疾病严重程度、发展变化、以及疗效和预后的有用指标[1-2]在全血或血浆中，利用d-d的抗体可以很容易的检测到d-d含量。已建立了多种有价值的d-d的检测方法[3]。但临床上迫切需要一种取样简单、操作方便、时间节约、结果准确的d-d测定方法。其中临床实验室常规检测方法是免疫比浊法。笔者采用丽水中心医院检验科2种测定d-d的方法并加以对照分析，为临床采用正确的d-d检测方法提供依据，现报告如下。 1 材料与方法 1.1 标本：样本来源于丽水中心医院门诊患者和病房患者2012年6月至12月收集的80例血清标本（其中无溶血、黄疸、乳糜的正常人血浆60例，无溶血、黄疸、乳糜的d-二聚体高值血20例，浓度在8～16μg/ml之间）。仪器采用法国stago血凝分析仪；美国博适triage检测仪。 1.2 试剂：stago公司提供的免疫比浊法所用试剂、定标液和质控液；免疫荧光定量法所用试剂为杭州丽珠医疗器械有限公司生产。 1.3 方法：d-d测定在法国stago血凝分析仪上采用免疫比浊法，在美国博适triage检测仪上采用免疫荧光定量法 。两种方法均按照试剂盒说明书、仪器说明书来设置相关参数进行测定。 1.4 统计学处理：应用spss20.0统计学软件，对所测有关精密度的数据进行正态分布检验，用均数±标准差（x±s）表示，进行成组t检验，对回收率进行卡方检验 。 2 结果 2.1 线性与灵敏度：取d-d配制浓度为6.0μg/mld-二聚体标准液，用生理盐水稀释成5种不同浓度的标准液（0.25，0.5，1.0，2.0，3.0，4.0）。分别用免疫比浊法和免疫荧光定量法测定d-d，进行线性试验。结果表明，免疫比浊法测定d-d，回归方程为y=0.024x+0.054，r=0.9992，线性关系良好。线性范围为0.22～4μg/ml。免疫荧光定量法测定d-d，线性范围为0.1～5μg/ml，回归方程为y=0.024 x+0.046，r=0.9996。在低于4μg/ml范围内两种方法测定d-d的线性范围接近。免疫比浊法的灵敏度为0.22μg/ml，免疫荧光定量法的灵敏度为0.1μg/ml。如需检测更高浓度的血浆d-d水平，则需对血浆标本进行预稀释。 2.2 精密度：将患者血浆配制为中、低2种不同浓度，各测20次。在stago血凝分析仪上采用免疫比浊法测定d-d.（d-d浓度在0.55±0.05μg/ml的cv为8.8%，d-d浓度在1.75μg/ml的cv值为5.0%）在美国博适triage检测仪上采用免疫荧光定量法测定d-d（d-d浓度在0.68±0.07μg/ml的cv为10.8%，d-d浓度在1.80±0.11μg/ml的cv值为6.0%）。免疫比浊法的精密度优于免疫荧光定量法，两种检测方法在低、中浓度比较中有显著性统计学意义。结果见表1. 2.3 干扰试验：在体外向正常人血浆中加入不同浓度胆红素、脂肪乳、血红蛋白。根据加入干扰物质前后的测定值判断干扰因素的影响结果。当加入的最高浓度为血红蛋白0.05）。 2.5 试剂稳定性试验 将试剂放置4℃冰箱1y，每月抽检，检测d-d正常水平与高值水平。并将试剂置室温22℃，7d，同样检测d-d正常水平与高值水平。结果显示免疫比浊法法和免疫荧光定量法所用试剂在4℃环境能放置1y，在室温条件下可放置7d。其检测性能未见改变。 3 讨论 d-二聚体是交联纤维蛋白降解的特异性分子标志物， d