杨学明《微生物与免疫学》医学免疫学实验-第三次实验.pptVIP

BEA Confidential * BEA Confidential * BEA Confidential * BEA Confidential * 间接法的原理：将已知抗原包被于塑料板上，然后加待测标本，如果标本中有相应的特异性抗体，即与固相上的抗原结合，形成抗原抗体复合物，然后加酶标二抗或酶标SPA，最后加底物显色。 BEA Confidential * BEA Confidential * 间接法的原理：将已知抗原包被于塑料板上，然后加待测标本，如果标本中有相应的特异性抗体，即与固相上的抗原结合，形成抗原抗体复合物，然后加酶标二抗或酶标SPA，最后加底物显色。 BEA Confidential * BEA Confidential * BEA Confidential * BEA Confidential * BEA Confidential * BEA Confidential * BEA Confidential * BEA Confidential * BEA Confidential * BEA Confidential * 间接法的原理：将已知抗原包被于塑料板上，然后加待测标本，如果标本中有相应的特异性抗体，即与固相上的抗原结合，形成抗原抗体复合物，然后加酶标二抗或酶标SPA，最后加底物显色。 BEA Confidential * BEA Confidential * BEA Confidential * BEA Confidential * BEA Confidential * BEA Confidential * BEA Confidential * BEA Confidential * BEA Confidential * BEA Confidential * BEA Confidential. | * 病原生物学 和免疫学实验 杨学明 微生物与免疫学教研室 BEA Confidential. | * 【实验内容】 1. 酶联免疫吸附试验 ① 双抗夹心法 ② 间接法 BEA Confidential. | * 凝集反应 沉淀反应 体 液 免 疫 检 测 免疫标记技术 酶免疫技术 免疫荧光技术 免疫胶体金技术 放射免疫技术 免疫印迹技术 化学发光技术 BEA Confidential. | * 酶联免疫吸附试验 BEA Confidential. | * 掌握酶联免疫吸附试验（ELISA）的实验 原理和操作方法。 【实验目的】 BEA Confidential. | * 将已知抗原或抗体吸附在固相载体（聚苯乙烯微 量反应板）表面，使抗原抗体反应在固相表面进行， 通过洗涤将固相上的抗原抗体复合物与液相中的游离 成分分离。 ELISA 检测通常分为直接法、间接法、双抗夹心 法和竞争抑制法，间接法适用于各种抗体的检测，双 抗夹心法用于检测液相中的可溶性抗原。 【原理与用途】 BEA Confidential. | * 一 ELISA双抗夹心法 BEA Confidential. | * 将已知抗体吸附在固相上，加入待测标本，标本 中的抗原与固相上已知抗体结合，再加入酶标抗体， 通过洗涤去除未吸附的抗体、未结合的抗原及酶标抗 体，加底物后，酶分解底物显色。 【双抗夹心法原理】 BEA Confidential. | * ELISA（双抗夹心法） BEA Confidential. | * 1. 预包被可拆微孔板条（包被HBsAb） 2. 阳性对照（基因工程HBsAg） 3. 阴性对照（正常人血清） 4. 酶标抗体（HRP标记的HBsAb） 5. 样品稀释液（含BSA缓冲液） 6. 洗涤液 7. 底物A液、底物B液 8. 终止液 9. 微量加样器、即时贴、37℃恒温箱、吸水纸等。 【材料】 BEA Confidential. | * 乙型肝炎病毒表面抗原检测（双抗夹心法） 1. 平衡： 　　将试剂盒各组分从盒中取出，室温平衡30分钟， 微孔板开封，余者即时以自封袋封存。 2.编号： 取所需数量微孔板固定于支架，设阴性、阳性、 空白对照，并按序编号。 【实验方法】 BEA Confidential. | * 3. 稀释： 每孔加入20μl 样品稀释液。 4. 加样： 分别在相应的孔中加入100μl 阴性、阳性对照 血清，空白孔不加。 5. 温育： 盖上即时贴，置37℃温育60分钟。 6. 洗涤： 用洗涤液充分洗涤5次（空白孔也要洗涤），洗 涤后扣干（每次保持5-10秒的浸泡时间）。