流式细胞技术基本原理及应用.ppt

* 使用与一抗相同种属来源、相同亚型、相同剂量和相同的免疫球蛋白及亚型的免疫球蛋白，用于消除由于抗体非特异性结合到细胞表面而产生的背景染色。 * * * * * * * * * * 作为一台分析机，分析速度和信号处理能力至关重要。可以看到与其他厂家的分析仪相比，Gallios高速下的产率真实有效。 * 在所有分析型流式细胞仪中最高。类似相机一百万像素和四百万像素的差别。 * 稀有细胞检测也是目前流式发展的趋势之一。 * * * Gallios另一人性化设计理念，是具有……节省操作者时间和精力，到达实验室前已自动完成开机的液流稳定和激光预热，实验结束无需照看仪器关机清洗，长假也不必担心仪器无人维护干涸堵塞 * 电压的调节靠滑动条直接拖拽，直观易掌握。 * 作为一款真正支持多色分析的仪器，硬件设计之外，软件的功能也非常重要。 * 应用领域宽泛 * 细胞周期是细胞物质积累与细胞分裂的循环过程。细胞遗传物质复制加倍，在分裂结束时平均分配到两个细胞。而在这个过程中RNA蛋白质大量合成,儿DNA只有在S期每个时相都有不同激酶和cyclin结合形成复合物共同推动周期的进程，也叫做Checkpoint。每个时相DNA含量也有不同我们通过DNA与特异染料结合的特点，就可以判断细胞所处的周期。P21，p16，p53 竞争性与cyclin-CDK复合物结合，阻止了周期的进程。 * 周期蛋白（cyclins)CDK,CKI抑制因子相互作用共同推进周期进程，同时通过对周期蛋白检测，可以判断细胞进入哪个阶段。Thapsigargin 类胡萝卜毒素 paclitaxel 紫杉醇引起细胞M期阻滞和凋亡。 * * vp16是一种化学药物鬼臼乙叉甙的简称，可用于绒癌的化疗 * JC-1 脂溶性染料，与线粒体膜结合，正常细胞的线粒体膜电位电压较高，可形成JC-1的聚集体，发出红色荧光，而线粒体膜电位降低的细胞，则会形成JC-1单体，发出绿色荧光 CCCP为线粒体电子传递链抑制剂 * CFP(cyan蓝绿色荧光蛋白) 长效稳定供液设计支持长时间样本分析 液流车系统 外接大容量鞘液桶不间断补液，保证内置鞘液盒液面恒定，消除液面下降引起系统压力变化对检测的影响 外接大容量废液桶 内置清洗液桶 定时自动开关机、清洗维护及远程诊断功能 简单直观的应用方式 实时补偿/脱机补偿/自动补偿 PRISM 浓缩柱形图真正支持多色分析 一张图上显示多达1024个表型组合结果（十色分析，210分析组合） 将实验所分析的所有细胞数据结果简单地浓缩在一张直方图上 能直接读出各种阴性或阳性组合的结果 清晰直观且便于数据的保存 颜色 点图 组合 2 1 22 3 3 23 4 6 24 5 10 25 6 15 26 7 21 27 10 45 210 支持最全面的生命科学研究内容 细胞生理功能研究（死活鉴定、细胞内pH值、细胞内钙流、膜电位、酶活性） 免疫功能研究（包括淋巴细胞亚群分析、细胞绝对计数、细胞活化、细胞因子、调节性T细胞、树突细胞、抗原特异性T细胞、Th17细胞等） 造血干细胞计数 血小板疾病及活化血小板检测 HLA-B27强制性脊柱炎筛查 白血病及淋巴瘤免疫分型、残留白血病检测 器官移植的配型及免疫状态监控 AIDS诊断及治疗监控 肿瘤相关研究（肿瘤相关基因表达、抗肿瘤药物作用机制及多药耐药、放化疗以及生物治疗疗效的研究、循环中肿瘤细胞等） 药物筛选，抗体研发，疫苗评估 干细胞研究（干细胞的分离、鉴定、功能分析等） 细胞周期和DNA倍体分析、DNA含量测定、细胞周期蛋白 细胞凋亡及凋亡相关蛋白 磷酸化蛋白的检测及信号传导通路的研究 细胞治疗…… 流式细胞仪应用举例 一、稳定细胞株的筛选 GFP转染后转染细胞（蓝色）与 空载体转染细胞（红色）的对比， 转染效率73％ 1、靶基因转染至目的细胞 2、检测报告基因-荧光蛋白 （GFP,YFP,Dsred）转染效率 3、阳性细胞的无菌分选 二、细胞周期/DNA含量的分析 常用染料： PI 7-AAD Hochest33342 G0/G1 S G2/M 肿瘤细胞判断标准： DNA指数 大于1.1或小于0.9 S期比例大于15% S+G2期比例大于20% 对抗肿瘤药物机制及疗效评价 分析单细胞群体，去除粘连细胞 FS SS A W A H 利用脉冲高度，面积，宽度三参数去除粘连细胞 细胞周期分析 / DNA含量分析 第三方软件分析周期 Multicycle，ModFit等等 决定cell cycles数 排除细胞碎片（debris） 执行分析 分析数据 信赖度分析 （Confidence analysis） 可信区间