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流式细胞分析术 Flow Cytometry(FCM) 什么是流式细胞分析术? 流式细胞术（flow cytometry,FCM)是一种可以对细胞或亚细胞结构进行快速测量的新型分析技术和分选技术. 流式细胞仪是一种可以同时检测同一细胞或生物集合的物理化学性质的仪器. 流式细胞仪:一种可以同时检测同一细胞或生物集合物理和化学性质的仪器. BC-032_TY0677 流式细胞分析仪(FCM) 流式细胞仪是近代细胞生物学,分子生物学,分子免疫学,和单克隆抗体技术,激光技术,电子计算机技术等学科高度发展\综合的结晶. FCM的应用标志着细胞学,肿瘤学,免疫学等进入了细胞和分子水平的研究. 使细胞或者生物集合的悬浮液流中,单个细胞排成一列,并逐一通过由高度汇聚的光束所确定的测量区.通过采集从细胞散射的光线以检测细胞的特性. 某些流式细胞分析仪也称作荧光激活细胞分选器(FACS)(fluorescence-activated cell sorting).这个名字更加强调荧光检测和对细胞的分选能力. 从某种意义上, FCM与光学显微镜有类似的功能,就是看微小的物体. 工作原理 Why use Flow Cytometry 1.High speed acquire : max 30,000 events per second 2.High accuracy More sensitive 3.Simultaneous Multiparameter Analysis 4.既是细胞分析技术,又是精确的分选技术. Flow Cytometry Is Made Of Fluid System(流路) Optical System(光路) Electronic System(电路) Computer System(计算机系统) Fluid System: Hydrodynamic Focusing(流体动力学聚焦) Flow Cell 通入鞘液 通入细胞流 流腔 鞘液 细胞悬液 Fluid System: Hydrodynimic Focusing(流体动力学聚焦) Fluid System: Hydrodynimic Focusing Sheath Sample 细胞流的速率主要由鞘液的速率,压差,和样品管中的浓度决定. 当鞘液压力小时,压差较小,中心截面半径很细,流速小, 测量速度慢,分辨率高 当鞘液压力大时,压差较大中心截面半径较大,流速也快, 测量速度快,但分辨率低. Fluid Optical System: 激光在Core处聚焦激发荧光 椭圆形光斑有利于对测试生物样品的均匀激发 Optical System: Laser Flow Cell Laser Bean Flow Cell Optical System: Laser Filter Set Argon Laser HeNe Laser Optical System:检测前向散射光与侧向散射光信号 Front Scatter,FS用于检测细胞的表面属性 Side Scatter,SS用于检测细胞的内部结构如胞浆内颗粒,核质比. FS和SS的强度与细胞或其他颗粒的大小,形状,及optical homogenity有关. Electronic System:用 PMT(光电倍增管放大信号） Electronic System: Discrimination or Threshold（Discard the Debris） Electronic System: Analog to Digital Electronic System: Leaner Scale Convert to Log Scale Flow Raw Data: List Mode Data Computer System: Data Display Computer System: Data Display Computer System: Gate Analysis Surface Marker: 细胞分选原理图: