土壤中分解尿素的细菌的分离与记数maomao.pptVIP

尿素[CO(NH2)2]——重要的农业氮肥。 只能被土壤中细菌分解为NH3才能被植物吸收利用 CO(NH2)2 + H2O CO2 +2NH3 提出的问题 —如何寻找耐高温的酶？ 解决问题的思路 —寻找耐高温环境； 原理 —高温淘汰其他菌，选出耐高温细菌， 耐高温菌种提取耐高温酶。 　　EMB培养基与大肠杆菌代谢产物产生紫色带金属光边的菌落 　　你认为哪位同学的结果更接近真实值？这两位同学的实验需要改进吗？如果需要，如何改进？ 　　第一位同学只涂布了一个平板，没有设置重复组，因此结果不具有说服力。第二位同学考虑到设置重复组的问题，涂布了3个平板，但是，其中1个平板的计数结果与另2个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。 ? 因此，这两位同学的实验需要改进，在设计实验时，一定要涂布至少3个平板，作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性。在分析实验结果时，一定要考虑所设置的重复组的结果是否一致，结果不一致，意味着操作有误，需要重新实验。 说明设置重复组的重要性。 注意事项 ①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30——300的平板上进行计数。 ②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平板中，经涂布，培养计算出菌落平均数。 ③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。 　　 在做本课题的实验时，A同学从对应106倍稀释的培养基中筛选出大约150个菌落。但是，其它同学在同样的稀释度下只选择出大约50个菌落。 　　其他同学认为A同学的结果有问题。他们分析可能是A同学的培养基被杂菌污染了，或者培养基中混入了其他含氮物质，因而导致不能分解尿素的细菌也能在该培养基上生长。 实例2 　　但是，A同学确信自己的实验操作准确无误，与其他同学的结果之所以不相同，是因为自己所选用的土壤样品不同。 　　但是，A同学确信自己的实验操作准确无误，与其他同学的结果之所以不相同，是因为自己所选用的土壤样品不同。但是，A同学在设计实验的时候并没有设置对照，因而此时也拿不出令同学们信服的证据。 　　你能通过设置对照，帮助A同学排除上述两个可能影响实验结果的因素吗？ 　　一是由于土样不同，二是由于培养基污染或操作失误。究竟是哪个原因，可以通过实验来证明。 　　一是由于土样不同，二是由于培养基污染或操作失误。究竟是哪个原因，可以通过实验来证明。 一种方案：可以由其他同学用与A同学一样的土样进行实验, 如果结果与A同学一致，则证明A无误; 如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。 另一种方案： 将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。 通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。 （三）设置对照 1、设置对照的目的： 排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。 对照实验是指除了 被测试 的条件外，其他条件都 相同 的实验。满足该条件的称为 对照组，未满足该条件的称为 实验 组。 （三）设置对照 判断培养基中是否有杂菌污染： 将未接种的培养基同时进行培养。 判断选择培养基是否具有筛选作用： 完全培养基（营养成分齐全）接种后培养 观察菌落数目。 主要目的是排除实验组中非测试因素对实验 结果的影响，提高实验结果的可信度。 实验设计 土壤中分解尿素的细菌的分离与记数 土壤中某样品细菌的分离与计数 　从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。 实验步骤 1．土壤取样 从肥沃、酸碱度接近中性的湿润土壤中取样。先铲去表层土3 cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。 “微生物的天然培养基” [一]土壤取样 数量最大、种类最多 大约70%—90%是细菌 ◆取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。 制备5个牛肉膏蛋白胨培养基和15个选择培养基。　　 实验步骤 2.制备培养基 怎样证明此培养基具有选择性呢？ 以尿素为 唯一氮源 的培养基 牛肉膏 蛋白胨 培养基 ?是 分离 尿素 细菌 判断该 培养基 有无选 择性 实验组 对照组 培养基类型 是否 接种 ?目的 ?结果 只生长尿素细菌 生长多种微生物 是 制备5个牛肉膏蛋白胨培养基和15个选择培养基。 注：每个稀释度下需要3个选择培养基，1个牛肉膏蛋白胨培养基。 稀释倍数