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ABO血型鉴定(生理盐水法) ABO血型鉴定（生理盐水法） 2009-01-22 14:07【大 中 小】【我要纠错】 　　1. 原理 　　根据红细胞上有或无A抗原或/和B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型四种。A型红细胞膜上含有A抗原，B型红细胞膜上含有B抗原，AB型红细胞膜上含有A、B抗原，抗A、抗B试剂是分别针对A抗原和B抗原的特异性抗体。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。所谓正定型，是用已知的抗A、抗B试剂与受检者的红细胞混合时，与抗A试剂发生凝集者即为A型，与抗B分型试剂发生凝集者即为B型，与抗A、抗B试剂均发生凝集者即为AB型，与抗A、抗B试剂均不凝集者即为O型。所谓反定型，是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗－A或/和抗－B. 　　2. 标本采集 　　2.1 标本种类：新抽取的抗凝血或手指末梢血和血清。 　　2.2 标本要求： 　　2.2.1 抗凝剂：如用抗凝血，多主张用EDTA K2（㎎/dL）抗凝。 　　2.2.2 用手指末梢血作血型检测时，最少样品量为100ul，如手指有 　　冻疮，则主张采耳垂血。 　　3. 标本储存：2小时内完成实验，室温放置下不超过8小时，4℃-8℃ 　　保存不超过48小时。 　　4. 标本运输：室温运输 　　5. 标本拒收标准：细菌污染、溶血标本不能作测定 　　6. 试剂 　　6.1 试剂名称：ABO血型检测试剂 　　6.2 试剂生产厂家：南京华欣药业生物工程有限公司 　　6.3 试剂组成 　　试剂1：抗A分型试剂（蓝色），效价1：128，2℃-8℃避光保存，室温放置不宜过久。 　　试剂2：抗B分型试剂（黄色），效价1：128，2℃-8℃避光保存，室温放置不宜过久。 　　试剂3：5％A、B及O型红细胞盐水悬液，自制。配制方法：分别采取已知A、 B、O三种血型的红细胞，经盐水洗涤3次，以压积红细胞配成不同浓度的红细胞悬液。　 红细胞悬液的配制 悬液浓度（％） 压积红细胞（滴） 盐水（滴） 2 5 10 20 1 1 1 1 2ml（40） 0.8ml（16） 0.4ml（8） 0.2ml（4） 　　为了防止红细胞悬液敏感性不一致，可随机采取3个或以上的健康成人血液，按A、B、O型分别混合后，按上法制备。 　　7. 操作步骤 　　7.1 玻片法 　　7.1.1 取清洁玻片1张（或白瓷板1块），用肥皂水刷洗后晾干，用蜡 　　笔划出小格，并注明A、B字样。将抗A试剂、抗B试剂各一滴分别滴于玻片（或瓷盘）上A、B处。分别取等体积待检血样（5％-10％红细胞悬液或全血）于抗A试剂和抗B试剂。 　　7.1.2 另取洁净玻片1张（或白瓷板1块），用蜡笔划成方格，标明A 　　细胞、B细胞和O细胞，用滴管各加受检者血清1滴，再分别用滴管滴加A、B和O型试剂红细胞悬液1滴。 　　7.1.3 用不同的竹签将分型试剂与待检血样调匀，同时不停的摇动玻 　　片（或瓷盘）并观察血型凝集（或溶血）反应。如以玻片做试验时，也可用低倍镜观察结果。 　　7.2 试管法 　　7.2.1 取洁净小试管（内径10mm×60mm）2支，分别标上A、B字样， 　　用滴管分别向A管滴加抗A分型试剂1滴。向B管滴加抗B分型试剂1滴。向A、B管各滴加待检血样的5％红细胞悬液各1滴，混合。 　　7.2.2 另取洁净小试管（内径10mm×60mm）3支，分别标明A、B和 　　O细胞。用滴管分别加入受检者血清1滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B和O型5％红细胞悬液1滴，混合。 　　7.2.3 摇匀后以1000转/分的速度离心1分钟判定结果。将试管轻轻 　　摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集（或溶血）现象。如肉眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。 　　8. 结果判断 　　8.1 观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于A、 　　B亚型、类B或cisAB的发现。 　　8.2 凝集强度判断标准： 　　4＋＝红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。 　　3＋＝红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。 　　2＋＝红细胞凝块分散成许多小块，见到游离红细胞。 　　1＋＝肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞。 　　±=镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细胞。 　　MF＝混合凝集外观是指镜下可见少数红细胞凝集，而绝大多数红细胞仍呈分散分布。 　　－表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。 　　8.3 按下表报告受检者红细胞ABO血型 　　 ABO血型正反定型结果 分型血清＋受检者红细胞 受检者 受检者血清＋试剂红细胞 抗－A ＋ — — ＋ 抗－B — ＋ — ＋ 抗－A＋B ＋ ＋ — ＋ 血型 A B O AB A细胞 — ＋ ＋ — B细胞