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第 27卷第 1期 高 校 化 学 工 程 学 报 No．1 、b1．27 2013 年 2月 JournalofChemicalEngineeringofChineseUniversities Feb 2Ol3 文章编号：1003—9015(2013)01—0108-05 网络出版地址：http：／w／wwcnki ．net／kcms／detail／33 ． 1141．TQI718．004-htmI 中性内切一p-葡聚糖酶基因在里氏木霉中的重组与表达 顾斌涛，江守坤，夏黎明 (浙江大学 化学工程与生物工程学系，浙江 杭州 310027) 摘 要：中性内切一p一葡聚糖酶在棉织物生物整理方面具有重要的应用价值，研究首先从特异腐质霉(Humicolains0le 菌株中克隆到一个中性内切-p一葡聚糖酶基因，将该基因置于里氏木霉(TrichodermareeseO纤维二糖水解酶 I强启动子 Pcbhl(及其信号肽)和终止子Tcbhl之间，并以pCAMBIA1300为载体骨架构建重组质粒pCB-PHT。采用根瘤农杆菌介 导转化技术将重组质粒pCB-PHT导入里氏木霉的分生孢子中，进一步筛选得到八个重组里氏木霉转化子。摇瓶发酵培 养 72h时，发酵液的中性内切．p·葡聚糖酶活力最高可达到98．8IU．mL 左右，是出发菌株的5．1倍。研究成功地实现 了外源中性内切．p．葡聚糖酶在丝状真菌里氏木霉中的重组与胞外表达，有关研究结果将在牛仔布水洗工业中发挥出重 要作用 。 关键词：中性内切．B-葡聚糖酶；里氏木霉；基因重组；表达；牛仔布；生物整理 中图分类号：Q556．9 文献标识码：A DOh 10．3969／j．issn．1003．9015．2013．01．0l8 RecombinationandExpressionofNeutralEndo——GlucanaseGenefrom Humico~ InsolensinTrichodermaReesei GU Bin-tao， JIANG Shou-kun， XIALi·ming (DepartmentofChemicalEngineeringandBioengineering，ZhejinagUniversity,Hnagzhou310027，China) Abstract： Neutralendo-p-glucanaseiswidelyusedforthebiofinishingapplicationinthetextileindustry．In ordertoimprovetheneurtalendo-p—glucanaseactivityofTrichodermreesei，theendo—p-glucanasegenefrom HumicolainsolenswasclonedbvmereversetranscriptionPCR method，andwasinsertedbetween reesei strongpromoterPcbhl(inc1udingsecreting signalpeptidesequence)nadterminator，furtherligatedto pCAMBIA1300vectortoconstructplasmidpCB-PHT．TheplasmidpCB-PHT Was trnasofrmedinot
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