天麻素对新生大鼠缺氧缺血合并低血糖脑损伤影响的研究.docVIP

精品论文 参考文献 天麻素对新生大鼠缺氧缺血合并低血糖脑损伤影响的研究 牛延军 金正勇 许春花（延边大学附属医院新生儿疾病研究室 吉林延吉 133000） 正常生理条件下，葡萄糖是维持脑代谢活动的重要能源之一，尤其对胎儿脑发育脑代谢活动至关重要。围产期缺氧缺血，易发生新生儿缺氧缺血性脑病（hypoxic-ischemic encephalopathy,HIE），一旦发病易导致新生儿死亡和神经系统的后遗症，糖代谢紊乱是新生儿缺氧缺血对代谢的重要影响之一，严重时均可造成脑损伤。目前葡萄糖对缺氧缺血脑损伤的作用日益受到关注，自20世纪80年代起国外学者先后对新生儿低血糖与脑损伤进行研究[1]，Lucas等学者的回顾性研究提示，新生儿低血糖可导致神经系统损害[1]。本实验拟探讨缺血缺氧合并低血糖情况下，天麻对脑组织的影响，探讨脑能量衰竭方面的发病机制、脑缺血缺氧损伤程度等，新生儿缺氧缺血性脑病合并低血糖与细胞凋亡有关，寻找能阻断多种发病环节的药物，寻求对细胞凋亡有抑制作用的安全有效药物，开发传统中药对治疗本病的基础数据是急需解决的问题。 中药对脑组织的作用诸见报道[2]。天麻作用及现代中医药学在活血化瘀、抗脂质过氧化、清除自由基、减轻脑水肿等方面进行研究，并得到肯定结果。 本研究采用新生大鼠缺血缺氧合并低血糖模型，用天麻素进行干预，观察缺氧缺血合并低血糖后脑细胞凋亡（apoptosis）及脑组织中超氧化物歧化酶（SOD）、一氧化氮（NO）含量的变化，探讨天麻素对缺血缺氧合并低血糖脑组织的保护，为临床应用提供有效的实验依据。 材料与方法 一、材料：7日龄新生wistar大鼠80只，体重为8-12克，无性别选择，由延边大学医学部动物科提供。天麻素注射液Gastrodin Injection)系广东中山市三才医药集团有限公司产品. 原位细胞凋亡检测试剂盒（TUNEL法）系ROCHEMOLECULARBIOCHEMICALS 产品，由神州迈新生物技术开发公司提供；SOD试剂盒、NO试剂盒由南京建成生物工程研究所提供。随机将wistar大鼠分为4组，既正常组，模型组(HIBD)，HI前低血糖组，天麻素干预组 二、模型制备[3]及给药方法 除正常组外，其余大鼠乙醚吸入麻醉后取仰卧位，在手术板上四肢固定，颈中部切口，分离左侧颈总动脉，结扎，缝合，放回原饲养环境中。1h后将缺血后新生大鼠置恒温37℃密封缺氧箱内，以2～3L/min速度吸入含8%氧气的气体，用OX-11测氧仪监测氧气浓度，持续2h。 HI前低血糖模型的制备采用HI前禁食12小时后再予缺氧缺血。HIE模型检验是行为观察及动物脑组织病理改变[2]。HIBD干预组即HI前低血糖组于模型后即刻腹腔注射天麻素注射液于模型后即刻腹腔注射天麻注射液1g/kg（10 ml/kg）。 三、取材方法及指标测定 （1）实验后大鼠均放回原饲养环境，48小时后取材。具体方法：将新生大鼠仰卧固定于手术板上，开胸腔，暴露心脏，穿刺至左室，切开右房，然后肝素化的生理盐水灌洗，灌洗至流出液清亮，再灌入4%多聚甲醛，灌注结束取左脑常规固定于10%中性福尔马林中，石蜡包埋。用原位末端标记法（TUNEL）检测脑细胞凋亡，用多功能彩色病理显微图像分析仪进行分析，测量每张标本目标总数、目标百分率、面密度（目标总面积/统计场总面积），以该三项指标作为每张标本的参数值，进行组间比较。 （2）脑组织匀浆制作及操作：造模 48小时断头处死，取左侧脑组织，称取200mg，放入生理盐水1ml作为匀浆介质，在微型匀浆器中充分匀浆。按照试剂盒说明书进行各项操作。 四、统计学处理 所得数据由延边大学医学院统计学教研室用SPSS统计软件处理，病理指标、生化指标均用单因素方差分析，所有数据x-+S表示。 结果 一、大脑皮质SOD含量及NO含量变化 正常组脑组织中SOD含量为34.02plusmn;5.44（NU/mg.pr），HI前低血糖组明显低于正常，天麻干预组脑组织中SOD含量明显高于HI前低血糖组及HIBD组（Plt;0.01）, 与正常对照组接近，（Plt;0.01）。表1 表1 大脑皮质SOD含量的测定值 （x-plusmn;s） 与正常组比较Plt;0.01 正常组脑组织中NO水平为2.63plusmn;0.84 (umol/g.pr)，