扩展青霉脂肪酶催化性质的研究.pdfVIP

药 　物 　生 　物 　技 　术 98 Pharmaceutical Biotechnology 　2000 ,7 (2) :98～10 1 文章编号 :100589 15 (2000) 扩展青霉脂肪酶催化性质的研究 郑 　毅 　龚福生 　施巧琴 　吴松刚 (福建师范大学生物工程学院 ,福州 ,350007) 　　摘 　要 　通过研究扩展青霉产生脂肪酶催化反应性质 :包括催化水解作用温度 、p H 适宜范围、酶的酸碱稳 定性 ,酶催化水解作用酯键位置专一性及逆向的催化作用等 ,提出该酶的催化反应机制的模型 。 关键词 　扩展青霉 ;脂肪酶 ;催化性质 　　不同来源的脂肪酶具有多方面的不同性质 ,从 2 3 　脂肪酶酯键位置专一性试验[4 ,5 ] 而导致各具特色的应用范围 ,决定其应用范围的因 通过脂肪酶催化水解橄榄油分析 ,反应系统如 素除了脂肪酶 自身的催化作用条件是一个重要研 下 :油水比 1 ∶1 、配酶量 100U/ ml 油酯 、反应介质为 究内容外 ,脂肪酶以底物甘油三酯中 1 ( 或 3) 位和 蒸馏水 、置于 32 ℃恒温摇床 ,转速 150r/ min 。反应 2 位酯键的识别和水解的反应性 ———酯键位置专 0h ,05h ,10h ,4 0h ,80h , 17h ,24h ,3 1h 分别取样 一性也是关键 ,早在 1935 年就对猪胰脂肪酶的位 作薄层层析 ,跟踪水解反应进程 ,根据 1 ,3二甘油 置专一性进行了研究 , 由于技术的限制直至 60 年 酯的存在及与 1 ,2二甘油酯量的比较判断酯键位 代 ,才确定猪胰脂肪酶仅水解 1 和 3 位酯键 ,此后 置专一性 。通过脂肪酶催化逆向合成分析 ,脂肪酶 ( ) 催化逆向反应系统如下 :甘油 20ml ,油酸 1ml ,酶液 相继报道黑曲霉和根霉的脂肪酶仅催化 1 或 3 位 酯键水解 ,对 2 位酯键无作用 ; 白地霉和圆弧青霉 2ml (50U/ ml) ,于 50ml 的三角瓶中 ,置在磁力搅拌 的脂肪酶无酯键位置专一性[ 1 ,2 ] 。 器上 ,搅拌反应 , 1h ,5h , 13h ,24h 分别取样薄层层 本文采用扩展青霉产生的高活力脂肪酶进行 析 ,跟踪逆向合成反应进程 ,根据 1 ,2二油酸甘油 酶催化水解反应和酯合成反应研究 ,通过与典型脂 酯的存在及量的变化判断酶催化位置专一性 。 肪酶 Lipolase 的比较 ,探讨该酶催化作用的酯键位 2 4 　脂肪酶催化逆向酯合成反应试验[4 ] 置选择性 ,提出了该酶催化反应机制的模式 。 酯合成反应系统包括甘油 、油酸 、酶组成 , 于 50ml 的三角瓶中 ,置在恒温磁力搅拌器上 ,定时取 1 　材 　料 样于 5ml 乙醇小三角瓶中 ,用标准 N aOH 滴定 ,酯 扩展青霉产脂肪酶、活力为 10 000U/ g ( 福建 合成效果以系统中油酸的消耗程度来衡量即: ( ) ( )