中药对超氧阴离子自由基清除率的测定.docxVIP

第 37 卷第 1 期2012 年 3 月广 州 化 学Guangzhou ChemistryVol. 37 No. 1Mar. 2012文章编号：1009-220X(2012)01-0032-05中药对超氧阴离子自由基清除率的测定林祥潮，黄晓东（闽江学院 化学与化学工程系，福建 福州 350108）-摘 要：邻苯三酚在碱性溶液中的自氧化反应产生超氧阴离子自由基（O2 ·），可迅-速氧化天青Ⅰ褪色。中药提取物可以抑制 O2 · 氧化天青Ⅰ褪色，根据该原理建立了-一种测定中药对 O2 · 清除率的新方法。测定体系最佳实验条件为 pH 9.0，天青Ⅰ用量为 5.0 mL，邻苯三酚用量为 0.8 mL，反应时间 9 min。测得六种中药的提取液清-除 O2 · 的效果，结果表明，清除能力顺序为: 车前子＞枸杞＞川芎＞当归＞茯苓＞射干。关键词：分光光度法；超氧阴离子自由基；中药；邻苯三酚；天青Ⅰ中图分类号：O657.3文献标识码：A超氧阴离子自由基（O2- ·）作为生物体所产生的一种自由基，大量研究证明，自由基的作用与生物衰老、某些疾病的发病机制密切相关。关于它的清除方法，光度测定已有一些报 道[1-7]，但以天青Ⅰ为指示物质，褪色光度法测定中药清除超氧阴离子自由基未见报道。本 文研究发现，在一定条件下，天青Ⅰ能被超氧阴离子自由基氧化而褪色，中药提取物可以清除溶液中的 O2- ·，从而使溶液吸光度下降的程度降低。据此原理建立了一种测定中药对O2- · 清除率的新方法。表 1 超氧阴离子自由基的检测方法-方法产生 O2 · 的指示反应光度监测的指示物质-O2 · 可氧化羟胺生成亚硝酸根，亚硝酸与氨基苯磺酸和 N-甲奈基二氨基乙烯反应生成红色化合物过硫酸铵-N,N,N,N’- 四甲基乙二胺羟胺氧化法[1]-体系产生 O2 ·-氯化硝基四氮唑蓝还原法[2]四甲基偶氮唑盐 还原法[3]超氧化钾（KO2）溶解于二甲基亚砜O2 · 与氯化硝基四氮唑蓝反应生成蓝色的化合物-和十八冠醚混合溶剂体系产生 O2 ·-O2 · 可氧化四甲基偶氮唑盐生成蓝紫色的化合物-邻苯三酚自氧化产生 O2 ·- · 在水中歧化生成 H O ，H O 可氧化O22 22 2光照核黄素法[4]-维生素 B2 受光照产生 O2 ·硫代碳酰腙类化合物生成蓝色氧化产物酶催化法[5]本方法--黄嘌呤被黄嘌呤酶催化氧化产生O2 ·O2 · 氧化 2,6-二氯靛酚褪色--邻苯三酚自氧化产生 O2 ·O2 · 可氧化天青Ⅰ褪色收稿日期：2012-03-02基金项目：福建省教育厅基金项目（2011JB11143）；闽江学院科技启动项目（No.YKQ1005）。作者简介：林祥潮（1956~），男，硕士，讲师；主要从事分析化学教学与研究。33林祥潮等：中药对超氧阴离子自由基清除率的测定第 1 期在表 1 所示的光度法中，羟胺氧化法由于甲萘胺溶液不稳定，因而线性相关性较差；氯化硝基四氮唑蓝还原法和四甲基偶氮唑盐还原法都需要昂贵的氮唑类化合物；光照核黄素法 中硫代碳酰腙类化合物需要合成；酶催化法需要昂贵的酶试剂且测定条件苛刻；而本方法只需用天青Ⅰ作为指示物质，指示反应简单直接，且指示物质易得价廉，体系稳定性好，能快 速测定不同中药材对 O2- · 的清除率。1实验1.1仪器和试剂722 型分光光度计（上海第三分析仪器制造厂）；828 型 pH 测试仪（奥立龙公司）；UV-2550 型紫外可见分光光度计（日本岛津）。邻苯三酚溶液：30 mmol/L，准确称取 0.1892 g 邻苯三酚，用 10 mmol/L 的盐酸溶液溶 解，定容于 50 mL 容量瓶中，此溶液需临场配制；Tris-HCl 缓冲溶液（pH 9.0）：将 50 mL0.1 mol/L Tris 溶液与 7.0 mL 0.1 mol/L 盐酸溶液混合，加水稀释至 100 mL；天青Ⅰ溶液：2.0×10-4 mol/L；以上试剂均为分析纯，实验用水为石英亚沸水。1.2实验方法1.2.1超氧自由基的测定取两支 25 mL 比色管，分别加入 5.0 mL 天青Ⅰ溶液和 1.4 mL pH 9.0 的 Tris-HCl 缓冲溶 液后，向其中一支加入 0.80 mL 30 mmol/L 的邻苯三酚溶液，另一支不加。分别用水稀释至刻度，在室温下反应 15 min，以水为参比，用 1 cm 比色皿在 602 nm 波长处测定体系的吸光 度。设不加邻苯三酚时体系的吸光度为 A0，加入邻苯三酚后体系的吸光度为 A1，则超氧自由基产生量可用ΔA＝A0－A1 表示。1.2.2超氧自由基清除率测定按“1.2.1”步骤操作，在加入 5.00 mL 天青Ⅰ溶液和 pH 9.0 的缓冲溶液后，