人参皂苷Rh2对人膀胱癌细胞T24增殖和凋亡的影响.docxVIP

apoptosisweremeasuredbyMTTmethodandflowcytometry．InaninvivoPDmodelproducedby1-methyl-4-phenyl-1，2，3，6-tetrahydropyri- dine(MPTP)treatment(20mg/kg，3times，ip)，nisslstainingandtyrosinehydroxylase(TH)immunohistochemistrywereusedtoobserve thedopaminergiccelldamageofcompactaofsubstantianigra(SNC)．Caspase-3positivecellnumberinSNCwasdeterminedbyusingimmu- nohistochemicalmethod．Results:InPC12cells，CAPE1．25μMsignificantlydecreasedcellviabilitylossandapoptosisrateinducedby MPP+．InPDmousemodel，nisslstainingandTHimmunohistochemistryshowedthesignificantlossofsurvivedneuronsandTH-positive neuronsinSNC．Caspase-3immunostainingshowedasignificantincreaseofcaspase-3positivecellnumberinPDmousemodel．Thetreat- mentwithCAPEsignificantlypreventedthelossofTH-positiveneuronsanddecreasedcaspase-3positivecellnumber．Conclusion:Thesere- sultssuggestthatCAPEhastheprotectiveeffectinmodelsofParkinson＇sdisease(PD)．Keywordscaffeicacidphenethylester;MPP+;MPTP;tyrosinehydroxylase;caspase-3人参皂苷Rh2 对人膀胱癌细胞T24增殖和凋亡的影响邝姮1 ，危建安2* ，曾汇霞1( 1 广州中医药大学第二临床医学院，广州510405; 2广东省中医院中心实验室，广州510006)摘要目的:探讨20(S)-人参皂苷-Rh2(GS-Rh2)对人膀胱癌T24细胞增殖和凋亡的影响及其可能的机制。方法:采用MTT法检测GS-Rh2对T24细胞增殖抑制率;光学显微镜观察GS-Rh2作用前后细胞形态变化;流式细胞仪检测GS-Rh2对T24细胞凋亡和细胞周期分布影响;RT-PCR检测mRNA表达。结果:GS-Rh2在5mg/L～21．97mg/L浓度范围内，对T24细胞增殖无明显抑制作用;21．97mg/L～160mg/L浓度范围内，GS-Rh2对人膀胱癌T24细胞的生长有抑制作用，呈量-效关系，IC50为37mg/L。T24细胞经GS-Rh2(40mg/L)作用后光镜下呈死亡形态改变;细胞增殖指数(PI)由42．534%下降至31．03%;早期凋亡细胞数明显增加; p53和mycmRNA表达下降。结论:GS-Rh2能显著抑制人膀胱癌T24细胞增殖、诱导T24细胞凋亡，其机制可能与GS-Rh2下调P53 和mycmRNA表达，阻滞细胞进入S/G2期等有关。关键词人参皂苷-Rh2;T24细胞;增殖;凋亡膀胱癌是以血尿为主要症状的癌症，是中国最常见的泌尿系统肿瘤，其主要病因是基因及环境因素的影响，目前膀胱癌的基本治疗手段为外科手术、放疗和化疗，但对晚期癌症的治疗效果不太显著。人参皂苷是人参的主要活性成分，目前研究发现，人参皂苷-Rh2(GS-Rh2)的抗癌作用最强。国内外文献先后报道GS-Rh2对人卵巢癌、黑色素瘤、肺腺癌细胞、前列腺癌等肿瘤细胞有抑制增殖和诱导凋亡的作用［1～4］，但关于其对膀胱癌细胞作用的研究较少。本实验就GS-Rh2对人膀胱癌T24细胞的作用及其可能机制进行探讨，旨在为膀胱癌的临床治疗提供更多的实验依据。1 材料与方法1．1试验药物20(S)-人参皂苷-Rh2(Ginsenoside-Rh2，GS- Rh2)，购自广东省药品检验所，规格:20mg/瓶，批号:111748- 200501。1．2细胞人膀胱移行细胞癌细胞T24(中国科学院上海生科院细胞资源中心)。1．3试剂胎牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司);MTT(美国AMRESCO公司，批号Amresco0793);AnnexinV-FITCkit(