生物制品工艺学---疫苗制品.pptVIP

由特定细菌、病毒、立克次体、衣原体等微生物及寄生虫制成的，接种动物后能产生自动免疫和预防疾病的一类生物制剂均称为疫苗。 二、　病毒类疫苗的制造方法 1　毒种的选择与减毒 毒株须具备的条件： （1）持有特定的抗原性； （2）有典型的形态和感染特定组织的特性，并能保持其生物学特性； （3）易在特定组织中大量繁殖； （4）不产生神经毒素或能引起机体损害的其它毒素； （5）如制备活疫苗，繁殖过程中无恢复原致病性的现象； （6）未被其它病毒污染。 2　病毒的繁殖 （1）活体动物培养 （2）鸡胚培养 （3）组织培养 （4）细胞培养； 细胞培养时需要控制： ①　常用的维持液和生长液 　　需要氨基酸、辅酶、维生素、葡萄糖和无机盐等。 ② 培养条件控制 a pH值：7.0±0.2； b CO2提供：通过保持环境CO2分压5%，控制pH。 c 氧的提供：通氧； d 容器内壁洁净度控制：用硫酸－铬酸混合液洗涤，后用纯水冲洗； e 细菌污染控制：彻底灭菌，加入一定量抗生素； f 培养温度和时间控制：37±1℃，时间2－4天。 3　疫苗的灭活 　　用甲醛或酚溶液灭活。 　　动物组织对灭活效果有影响；灭活时间要合适。 5　冻干 　　冻干的疫苗充氮或真空密封保存。 ③应用基因工程或化学交联方法将B细胞表位结合到HbsAg,核心Ag或轮状病毒核心表面，以增强免疫原性，特别是HbcAg具有T细胞依赖性和非依赖性免疫作用，是较为理想的颗粒型载体。 ④有些病原结构基因的表达可产生不含核酸的病毒样颗粒，人类细小病毒B19株的壳蛋白可形成空心外壳；在痘苗中同时表达HIV的gag和env基因可形成类似病毒的颗粒。 （3）蛋白质工程抗原 ①多个寡肽串联成“鸡尾酒式疫苗”是首先针对恶性疟原虫而提出的，是将多个不同的B细胞表位和多个TH细胞表位串联起来，同时删除可能存在的抑制性T细胞（suppressor T cell，Ts）表位。 ②另一个也属于蛋白质工程范畴，是将本来在细胞内表达的抗原加以改造，使之表达于细胞膜表面，以增强其免疫原性。此外，将RSV的两个表面抗原G和F组合成一个蛋白质的研究也相当深入，组合似不影响到它们各自的抗原特异性。 （4）载体疫苗系统(Vector vaccine system) ①基于病毒的载体活疫苗； ②基于质粒DNA的非病毒载体疫苗。 前者方向是“非复制型”载体，需克服不安全性和不易加强使用的缺点；后者方向是改进导入效率、提高抗原表达、增强免疫反应强度、克服潜在的致癌及免疫病理作用。 其优点是： 廉价、高效、易于组合成多价疫苗，是新型疫苗的重要组成部分。 其缺点是： ①尽管用于载体研究的这些微生物都是疫苗株，但做为活疫苗载体，可能产生接种副反应。 ②机体内针对载体的抗体，不论是免疫前存在的，或是免疫后产生的，都会对相应载体疫苗的再次使用产生一定影响，从而影响其免疫效果。 （5）免疫佐剂与联合免疫 ①强有力大都胞壁二肽的衍化物，如Syntex佐剂对多肽和寡肽都有很强的佐剂作用，能诱生抗体和细胞介导免疫，甚至超过了福氏完全佐剂，且无热源性，不引起肉芽肿、关节炎或其他组织损害。 在用HCG-?的37肽作为避孕疫苗进行人体实验时使用了这类佐剂。 ②淋巴因子如胸腺肽、白细胞介素-2、γ-干扰素等均曾用于免疫增强目的。IL-2似乎只对某些抗原有佐剂作用，且须每天注射。 ③缓慢释放抗原的微胶囊（microsphere），虽不是佐剂，却能增强免疫效果。例如丙交酯与乙交酯共聚物，颗粒可达至3mm，小至1μm。 ④Al（OH）3依然独占鳌头。佐剂不但是亚单位疫苗成功的关键，而且还可通过选择不同的佐剂改变疫苗免疫反应类型，增加疫苗用途，提高新的免疫接种途径。 不同类型疫苗联合应用，以达互补效果，是近年一些难度较大疫苗研制的新途径。 1、艾滋病（AIDS）疫苗 （1）研究的三阶段： ①最早使用其膜抗原gp120（Glucose protein 120） ②膜抗原加其他能诱发细胞免疫抗原的多抗原疫苗的复杂设计； ③在泰国使用gp120亚单位疫苗数千人免疫接苗无效后，改为先用重组痘病毒ALVA（疫苗注射后），再使用gp120亚单位疫苗加强，80%以上的人产生了特异的体液和细胞免疫反应。 （2）HIV感染特点： ①HIV直接感染破坏免疫细胞； ②HIV变异极快。 （3）AIDS疫苗研究方向： ①能诱发有效的中和抗体，阻止或大部阻止HIV感染免疫细胞； ②能诱发强细胞免疫； ③中和抗体屏障被部分突破时能有效清除被感染细胞，是研究中应统筹考虑的。 2、乙型肝炎病毒（HBV）疫苗 （1）目前存在的问