中国美利奴绵羊磷脂酶Czeta基因表达载体的构建及原核表达.pdf

动物医学进展， ， （ ）： ２０１４ ３５ １２ １０４１０９ － Ｐｒｏ ｒｅｓｓｉｎＶｅｔｅｒｉｎａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｇ 　 　 ｙ 　 中国美利奴绵羊磷脂酶 基因 Ｃｚｅｔａ 　 表达载体的构建及原核表达 １ １ １ １ １ １ ＊ · ， ， ， ， ， 木尔扎提 阿勒腾别克 刘 强 贺志锐 王银龙 乌热力哈孜 赛务加甫 　 （ ， ） 石河子大学动物科技学院 新疆石河子 ８３２００３ ： （ ） ， ， 摘 要 构建美利奴绵羊磷脂酶 ＣｚｅｔａＰＬＣ 融合蛋白表达载体 并在原核细胞内表达及纯化 为其特 　　 　 　 ζ 。 ， 异性抗体的制备及生物学功能研究奠定基础 用ＰＣＲ技术扩增出ＰＬＣ 基因片段 亚克隆到原核表达载体 ζ ， （ ） ， ， Ｃｚｎ１中 导入ＡｒｃｔｉｃＥｘ ｒｅｓｓＴＭ ＤＥ３ 感受态细胞 ＩＰＴＧ诱导表达 收样后进行 ＳＤＳＰＡＧＥ 电泳或 ｐ 　 ｐ 　 － 。 。 ， 检验 的表达情况 用镍离子亲和层析的方法大量纯化融合蛋白 结果显示 重组质粒 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ ＰＬＣ 　 ζ 、 。 （ ） 经ＰＣＲ 酶切和测序鉴定证明载体构建正确 Ｃｚｎ１表达载体在 ＡｒｃｔｉｃＥｘ ｒｅｓｓＴＭ ＤＥ３ 表达菌中能很 ｐ 　 ｐ 　 。 ， 。 好地表达融合蛋白 表达纯化后可获得了分子量约７４ｋｕ的融合蛋白 符合预期大小 成功构建 Ｃｚｎ１ ｐ － ， ， ， 原核表达载体 表达并纯化了其融合蛋白 试验表明其蛋白分子的完整性良好 这将有利 ＰＬＣ