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快速冰冻病理技术 潍坊医学院病理学教研室 刘雨清 2014.3 一、概述 冰冻病理是通过手术切取一小块活组织，通过特制的包埋剂，将组织冻结于-20度左右，切成薄片并染色，进行镜下观察、诊断，以帮助临床医生确定手术方案的一项技术。 是临床手术科室与病理科的一种紧急会诊。 快速冰冻病理技术发展 * 1818年由Pieter 首先创造发明的。 * 1891年Halsted和Accarty将冰冻切片技 术列为正式诊断方法。 * 1960年Cryostat冰冻切片机正式应用于临床后，冰冻切片质量有了很大提高。 目前, 此项技术已普遍应用于临床，解决手术中的病理诊断问题。 随着冰冻切片技术和临床外科手术的发展，要求做冰冻的病例逐年增多。 如：乳腺、甲状腺、卵巢等等。 冰冻病理的目的 主要： 1.确定病变的性质 （炎症、肿瘤及其良恶性）； 2.确定切除肿瘤的边缘有无癌组织残留 以明确手术范围。 3.确认切除的组织 例如甲状旁腺、输卵管及异位组织等。 4.确定切除的淋巴结有无转移及转移程度。 二、准备工作 1．快速活检患方知情同意书 相关临床医师应向患者和（或）患者授权人说明快速活检的意义和局限性，取得患者和（或）患方的同意，并在《手术中快速活检患方知情同意书》上签字。 冰冻快速病理诊断知情同意书 术中冰冻快速病理学检查是实施手术过程中与手术方案相关的病理诊断手段，如确定病变的性质、病变扩散情况、 确定边缘或切端有无病变残留等，但因技术方法的限制，如时间短促、取材有限等，存在一定的局限性和误诊的可能性（通常是5%的误诊率）。某些病例难以快速做出明确诊断，需待常规石蜡切片进一步完成诊断，故向病人及家属说明。 --------科患者-------（男/女，年龄--------岁，住院号----------）和家属已知晓上述情况，同意手术中快速冰冻病理检查。 签字人----------与病人关系---------------- 身份证号------------------ 年 月 日 2.向病理科递交快速活检申请单 临床手术医师应向病理科递交快速活检申请单 申请单需填写： 患者的病史， 重要的影像学、 实验室检查结果和 提请病理医师特别关注的问题等。 尽可能不在手术进行过程中临时申请快速活检。 3.手术中快速活检应由副主任医师以上的病理医师主持。 尚不具备相应条件的病理科不应勉强开展手术中快速活检业务。 4．负责快速活检的病理医师应了解患者的： ①临床情况 ②手术所见 ③既往有关的病理学检查情况。 （二）标本的巨检、取材和记录 1. 病理科验收快速活检申请单和标本后，应参照普通活体组织病理学检查常规的有关规定，立即进行标本的巨检、取材和记录。 2.主持快速活检的病理医师应亲自参与标本的巨检和取材（或指导取材）。 3.通常选取具有代表性病变组织1或2块，需要时，增加取材块数 　　 （三）组织切片的制备 　 冰冻切片的种类较多，有低温恒冷箱冰冻切片法，二氧化碳冰冻切片法，甲醇循环制冷冰冻切片法，半导体冰冻切片法和氯乙烷冰冻切片法等。 现在常用的是低温恒冷箱冰冻切片法。 低温恒冷箱冷冻切片机 机箱面上有电子控制板，八个键： 1.冷冻键和除霜键，启动即时冷冻键，进行工作状态，可持续10mins。启动即时除霜键，可将工作间顶部后面的制冷栅上的霜除掉，可持续15mins。 2.照明键，启动该键可照明工作间，有利工作及观察组织的冰冻状况。 操 作 过 程 1. 取材，未固定的组织取材，不能太大、太厚，最好为24×24×2mm。 2. 取出组织支承器，放平摆好组织，周边滴上包埋剂，速放于冷冻台上，冰冻。小组织的应先取一支承器，滴上包埋剂让其冷冻，形成一个小台后，再放上细小组织，滴上包埋剂。 冰冻切片的快速染色法 冰冻切片附贴于载玻片后，立即放入恒冷箱中的固定液固定1分钟后即可染色。 这样可以使切片中细胞内各种物质都在没有任何变化的情况下被固定起来，这样制作固定切片好，核染色质清晰，核仁明显，其他物质都完好保存。 染 色 方 法 快速冰冻切片制备流程 1. 完成冷冻HE染色切片制备的时间通 常为20~25min。 2. 恒冷箱切片机制片：至少应于切片前1h开机预冷，冷室温度一般为