分子生物学-第四讲DNA复制.ppt

A replication eye forms a theta structure in circular DNA. 1）端粒（Telomere） 、概念：是真核生物染色体末端的一种特殊结构 组成：端粒DNA / 端粒蛋白 （1）端粒蛋白 ：非组蛋白 2）端粒酶 ①、组成 （1）蛋白质：逆转录酶 （2）RNA：约150nt，部分序列与端粒DNA互补， 可作为合成端粒DNA的模板 （端粒酶是自身携带RNA模板的逆转录酶） ②、功能：负责端粒DNA的延长，维持端粒的长度 3、存在部位： 在干细胞、生殖细胞和肿瘤细胞， 才可以检测到具有活性的端粒酶 4、端粒酶和衰老、肿瘤有关 primase primase ...TTGGGGTTGGGGTTGGGGTTGGGGTTGGGGTTG ...AACCCCAACCCC CCCCAAC 5’ 3’ ...TTGGGGTTGGGGTTGGGGTTGGGGTTGGGGTTG ...AACCCCAACCCC CAACCCCAAC 5’ 3’ ...TTGGGGTTGGGGTTGGGGTTGGGGTTGGGGTTG ...AACCCCAACCCC CCAACCC CAACCCCAAC 5’ 3’ ...TTGGGGTTGGGGTTGGGGTTGGGGTTGGGGTTG ...AACCCCAACCCC AACCCCAACCC 5’ 3’ DNA polymerase 引物合成 延伸 引物切除 3’ 5’ C链的合成 [1] 引发酶以G链3’端为模板合成一段引物 [2] DNA聚合酶以G链为模板，补齐C链缺口 [3] 去除引物，在G链3’端留下一个12~16个核苷 酸的overhang（突出端） 4）端粒的形成 ①、端粒DNA在与端粒蛋白共同作用下自身回折，在染色体的末端形成一个大的DNA套索结构，即T -环(telomere loop)。 ②、端粒G链3′单链末端取代了端粒上游区域的相同序列，形成D-环 3、端粒DNA与端粒蛋白（非组蛋白）结合 一分子的 DNA pol III. 协同合成前导链和后随链 四、复制终止 1、环形DNA复制的终止 a、终止序列 E.coli 有两个终止区域，分别结合专一性的终 止蛋白 序列一：terE terD terA 序列二：terF terB terC 每个区域只对一个方向的复制叉起作用 b、专一性终止蛋白 E.coli 中由 tus gene 编码 （terminus utilization substance） 通过抑制DNA螺旋酶而发挥终止作用 每次复制时只使用一个终止位点 ter 2、细菌(E.coli)DNA每个细胞周期只复制一次 每个细胞周期复制一次可能受OriC甲基化的控制 3、 线性DNA的末端复制的问题 ? 环状DNA复制是否存在这样的问题,为什么? （1） 线状 DNA的复制5’末端短缩的解决模式 a、 从开始就采取环化的形式 －－－λ噬菌体 b、 象T7噬菌体一样采取连环分子的形式 利用自身线性DNA末端的重复序列－－ 通过末端互补形成连环分子 c、 最直接的办法－－－引入蛋白质直接从末端起始复制 如－－－腺病毒－2、phageΦ29、脊髓灰质炎病毒 d、 痘病病毒的末端由发夹结构连接 复制完成后错切连接 ? ? 二聚体 3‘-OH ATCGTAGC ATCGTAGC 3‘-OH T7噬菌体的末端复制 专一性核酸内切酶 腺病毒（Adnovirus-2） DNA的复制 35937 bp TP C G IR 103-162 IR ; 包括 50bp的复制原点、富含A/T、有一个高度保守的G／C对 pTP ; 末端蛋白的前体 80 kd →