沉降菌测试SOP.docxVIP

沉降菌测试规程目的/Purpose 建立洁净室（区）沉降菌的测试规程。确保QA/QC人员正确进行沉降菌的测试。范围/Scope 适用于xxxx有限公司符合2010年版GMP/cGMP的洁净室（区）沉降菌的测定和环境的验证。职责/Responsibility QA、QC人员有责任阅读、理解及执行本规程的指令。QA/QC人员负责洁净室（区）沉降菌的测试。QC人员负责沉降菌的培养计数、鉴别及分析，并写出报告。QA负责人应确保相关人员经过本规程的培训考核，并监督本规程执行。QA负责此规程的修订及更新。定义/Definitions菌落：由单个细菌（或其他微生物）细胞或一堆同种细胞在适宜固体培养基表面或内 部生长繁殖到一定程度，形成肉眼可见的子细胞群落。沉降菌：采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度。规程/Procedure 测试方法测试材料、辅助设备以及培养基培养皿：直径90mm培养皿；生化培养箱；培养基：TSAWLP（含卵磷脂和吐温80的大豆胰蛋白琼脂）。测试步骤测试前状态确认在静态测试时，对单向流洁净室（区）而言，测试宜在生产操作人员撤离现场并空调系统自净不少于10min后开始；对非单向流洁净室（区），测试宜在生产操作人员撤离现场并空调系统自净30min后开始。静态测试时，室内测试人员不得多于2人。环境温湿度应与GMP或工艺要求相适应。无特殊要求时，温度在18~26℃，相对湿度在45~65%为宜。在皿底做好标记，编号规则详见《洁净室环境监控规程》。打开培养皿盖，使培养基暴露至多4小时（单个沉降碟的暴露时间可以少于4小时，同一位置可使用多个沉降碟连续进行监测达4小时并累计计数），再将培养皿盖盖上后倒置培养。培养皿的培养条件详见《监测平皿检验规程》采样点数目及其布置 最少采样点数目：沉降菌的最少采样点数可按表1确定，在满足最少采样点数的同时，还宜满足最少培养皿数，见表2。表1最少采样点数目面积（㎡）洁净度级别面积 ㎡洁净度级别A级B、C级D级A级B、C级D级102～322≥20010～20422≥400～10001604013≥20～40822≥1000～200040040032≥40～1001643200080080063注：表中的面积，对于单向流洁净室，是指送风口面积。对于非单向流洁净室是指房间的面积表2最少培养皿数洁净度级别所需90mm培养皿数（以沉降菌4小时计）A级B、C级D级1422采样点的布置：生产车间和微生物检测室每个区域详细的采样点参照各洁净室环境监控规程。采样频率：参照各洁净室环境监控规程。结果计算用计数方法得出各个培养皿的菌落数；平均菌落数的计算，见式（1）。M1+M2+M3+Mn平均菌落数M=n式中：M ——平均菌落数；M1——1号培养皿菌落数；M2——2号培养皿菌落数；Mn——n号培养皿总数。结果评定：使用TSAWLP（含卵磷脂和吐温80的大豆胰蛋白琼脂）培养基，用平均菌落数判断洁净室（区）空气中的微生物。沉降菌监测结果必须低于警戒限，若超过警戒限应进行相应检查和追踪调查，包括对接近警戒限的房间沉降菌结果的复查及调查其他环境监控项目。超出行动限者，须启动调查，并且在调查基础上采取纠正/预防措施。