中分子量可溶性丝素蛋白的制备的研究.pdfVIP

中分子量可溶性丝素蛋白的制备的研究 李锦杰，赵东旭，马增红 北京理工大学生命科学与技术学院，北京（100081 ） E-mail ：lijinjie0421@ 摘 要：研究中分子量可溶性丝素蛋白的制备工艺。在温和条件即37℃下，利用0.5 % Na 2 CO3 溶液对蚕茧碎片进行脱胶，然后在30% 乙醇—40% CaCl 2 溶液中对脱胶 所得到的丝素蛋白进行降解，在脱胶和降解过程中，对样品进行一定的超声 波处理，最后得到的丝素蛋白进行葡聚糖凝胶G-100层析。通过蚕茧碎片的脱胶和降 解得到了可溶性的丝素蛋白，最后通过凝胶过滤，收集到了中分子量的丝素蛋白。0.5 % Na 2 CO3 溶液能对蚕茧进行有效的脱胶，30% 乙醇—40% CaCl 2 溶液降解丝素蛋 白能得到可溶性的丝素蛋白，超声处理能有效的加速蚕茧的脱胶和丝素蛋白 的降解，葡聚糖凝胶G-100层析能够分离得到中分子量的丝素蛋白。 关键词：丝素蛋白；0.5 % Na2 CO3 ；30% 乙醇—40% CaCl 2 ；超声处理；葡聚糖G-100 丝素蛋白在生物医学材料、生物传感器、食品等领域得到了广泛而深入的研究，随着丝 素蛋白应用领域的不断拓宽，丝素作为一种生物相容性良好、无毒、无污染、无刺激性、可 生物降解的天然高分子蛋白质，将有更广阔的应用前景[1,2] 。天然丝素蛋白不溶于水，要使 其应用于食品、化妆品、医药等方面必须先制备成可溶性丝素蛋白，目前一般采用中性盐溶 液溶解丝素蛋白[3,4]，脱盐后得到丝素蛋白溶液，再经干燥即制得可溶性丝素蛋白。 本研究为了保持丝素蛋白的生物活性[5]，在温和条件，即37℃时用0.5 % Na2 CO3 对蚕 茧进行脱胶，然后得到的不溶性丝素蛋白在30%乙醇—40% CaCl 2 的体系中降解，在脱胶 和降解的过程对样品进行了超声处理，得到的可溶性丝素蛋白经过葡聚糖凝胶G-100 凝胶层 析，分离得到中分子量的丝素蛋白。 1 材料与方法 1.1 原料、试剂与仪器 所用原料蚕茧购于江西农科院，使用时剔除蚕茧中的杂物，剪成0.2cm 见方的碎片。葡 聚糖凝胶G-100 购于北京拜尔迪生物公司，分析纯，其他试剂也均为国产分析纯。 气浴恒温震荡器，江苏金坛市宏华仪器厂；KQ-250B 超声波清洗器，昆山市超声波仪 器有限公司。 1.2 蚕茧的脱胶 取2g 蚕茧碎片2 份，分别置于250mL 三角瓶中，放入 100mL 0.5 % Na CO 溶液中， 2 3 质量体积比 1:50(g:mL)，加入溶液后进行脱气处理10min 左右，使蚕茧碎片全部混合于液面 下。然后密封后在温度为 37℃～38℃的摇床中反应。两个三角瓶分别标记为：A 和 B 。脱 胶期间注意远离摇床的风口，并且经常调整各瓶位置，使得各瓶的受热均匀。 每24h 进行脱胶液的更换，A 在进行下一次脱胶处理的前2h （即脱胶22h 时）进行超 声波处理，处理时间总计约30min 。B 在整个脱胶过程中都不进行超声处理。 第一次脱胶处理24h 后，将蚕丝混悬液置于布氏漏斗中，两层滤纸过滤。保存滤液，取 1mL 离心（10000g×30min），上清液稀释一定倍数后检测OD280 处的吸光度。过滤后的滤 - 1 - 饼用等温度的约 100mL 的0.5 %Na2CO3 溶液冲洗，然后继续进行脱胶处理。 第二、三、四次脱胶处理24h 后操作同上。 共脱胶96h 。最后一次过滤后的滤饼先用等温度的约100mL 的