人cxc型趋化因子受体cxcr6真核表达载体的构建及生物学功能研究.pdfVIP

学 报 ５７０ ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　２００８，３９（６）：５７０－５７４ 人ＣＸＣ型趋化因子受体 ＣＸＣＲ６真核表达载体的 构建及生物学功能研究   林森森，赵人平，万淑颍，袁胜涛 ，张陆勇 （中国药科大学新药筛选中心，南京２１０００９） 摘　要　目的：克隆和构建带人ＣＸＣ型趋化因子受体６（ＣＸＣＲ６）基因的真核表达载体ｐｃＤＮＡ３１（＋）ＣＸＣＲ６，分析瞬 时转染ＣＸＣＲ６基因对人乳腺癌细胞ＭＤＡＭＢ２３１迁移能力的影响。方法：Ｔｒｉｚｏｌ一步法抽提人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ） 总ＲＮＡ，ＲＴＰＣＲ扩增ＣＸＣＲ６全长基因，克隆入Ｔ载体，测序，双酶切连入真核表达载体ｐｃＤＮＡ３１（＋），酶切鉴定。将构 建好的ｐｃＤＮＡ３１（＋）ＣＸＣＲ６瞬时转染ＭＤＡＭＢ２３１细胞，ＲＴＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ鉴定重组质粒的表达。利用微孔隔 离小室检测转入人ＣＸＣＲ６基因的ＭＤＡＭＢ２３１细胞的迁移能力。结果：扩增出人 ＣＸＣＲ６基因全长，测序结果和 ＧｅｎＢａｎｋ 记载完全一致，成功克隆入真核表达载体ｐｃＤＮＡ３１（＋）。瞬时转染ｐｃＤＮＡ３１（＋）ＣＸＣＲ６显著增强ＭＤＡＭＢ２３１细胞 的迁移能力。结论：成功构建带有人ＣＸＣＲ６基因的真核表达载体ｐｃＤＮＡ３１（＋）ＣＸＣＲ６，为ＣＸＣＲ６在肿瘤学中的研究奠 定基础。 关键词　人ＣＸＣ趋化因子受体６；真核表达载体ｐｃＤＮＡ３１（＋）；肿瘤细胞迁移 中图分类号　Ｑ７８５　　文献标识码　Ａ　　文章编号　１０００－５０４８（２００８）０６－０５７０－０５ ＣｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆｅｕｋａｒｙｏｔｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒｏｆｈｕｍａｎｃｈｅｍｏｋｉｎｅＣＸＣｍｏｔｉｆ ｒｅｃｅｐｔｏｒ６ａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｉｔｓｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｆｕｎｃｔｉｏｎ   ＬＩＮＳｅｎｓｅｎ牞ＺＨＡＯＲｅｎｐｉｎｇ牞ＷＡＮＳｈｕｙｉｎｇ牞ＹＵＡＮＳｈｅｎｇｔａｏ牞ＺＨＡＮＧＬｕｙｏｎｇ ＮｅｗＤｒｕｇＳｃｒｅｅｎｉｎｇＣｅｎｔｅｒ牞ＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ牞Ｎａｎｊｉｎｇ２１０００９牞Ｃｈｉｎａ Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ａｉｍ牶ＴｏｃｏｎｓｔｒｕｃｔｔｈｅｅｕｋａｒｙｏｔｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒｆｏｒｈｕｍａｎＣＸＣＲ６ａｎｄｔｏｓｔｕｄｙｔｈｅｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｆｕｎｃ ｔｉｏｎｏｆＣＸＣＲ６ｉｎｃａｎｃｅｒｍｅｔａｓｔａｓｉｓＭｅｔｈｏｄｓ牶ＴｈｅｔｏｔａｌＲＮＡｗａｓｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｈｕｍａｎｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｂｌｏｏｄｍｏｎｏｎｕ ｃｌｅａｒｃｅｌｌ牗ＰＢＭＣ牘ｗｉｔｈＴｒｉｚｏｌ．ＣＸＣＲ６ｇｅｎｅｗａｓａｍｐｌｉｆｉｅｄｂｙＲＴＰＣＲ牞ａｎｄｔｈｅｎｉｎｓｅｒｔｅｄｉｎｔｏｐＧＥＭＴｖｅｃ ｔｏｒｓＤＮＡｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇｗａｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄｂｅｆｏｒｅｔｈｅａｍｐｌｉｆｉｅｄｐｒｏｄｕｃｔｓｗｅｒｅｃｌｏｎｅｄｉｎｔｏｔｈｅｅｕｋａｒｙｏｔｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｖｅｃｔｏｒｐｃＤＮＡ３１牗＋牘ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｂｙｔｈｅｄｏｕｂｌｅｄｉｇｅｓｔｉｏｎＴｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｖｅｃｔｏｒｗａｓｔｒａｎｓｉｅｎｔｌｙｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｉｎｔｏ ＭＤＡＭＢ２３１ｃｅｌｌｓｂｙｍｅａｎｓｏｆｌｉｐｏｓｏｍｅａｎｄｉｔｓｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｗａｓｅｘａｍｉｎｅｄｂｙＲＴＰＣＲａｎｄＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇＡ ｔｒａｎｓｗｅｌｌａｓｓａｙｗａｓｅｍｐｌｏｙｅｄｔｏｅｘａｍｉｎｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＣＸＣＲ６ｏｎｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒｃｅｌｌ ｍｉｇｒａｔｉｏｎＲｅｓｕｌｔｓ牶Ｔｈｅａｍｐｌｉｆｉｅｄｐｒｏｄｕｃｔｓｗｅｒｅｃｏｎｆｉｒｍｅｄａｓ