兽医原生动物种质资源库的建立.pdf

第32 卷 增刊 水 生 生 物 学 报 Vol.32, Suppl. 2008 年5 月 ACTA HYDROBIOLOGICA SINICA May, 2008 DOI 号：10.3724/SP.J.0000.2008.70024 兽医原生动物种质资源库的建立 刘光远 殷 宏 罗建勋 田占成 白 启 ( 中国农业科学院兰州兽医研究所, 家畜疫病病原生物学国家重点实验室, 甘肃省动物寄生虫病重点实验室, 兰州 730046) 摘要：利用生物学等方法对流行于我国的一些主要的原生动物进行收集、分离、鉴定与保藏，陈述病原收集与鉴 定的一般方法，并介绍已收集的主要原生动物种类、传播媒介与传播方式。自野外采集动物血液、传播媒介、相 关组织、排泄物等，根据对病原形态鉴定、传播媒介鉴定、实验性感染易感动物、单一虫株克隆、不同致病部位 等方法，对我国不同地区、不同家畜的原虫病病原进行分离，并通过媒介传播试验确定传播媒介的种类与传播方 式；采用18S rRNA 基因测序方法，对本实验室已分离的部分原虫进行进化关系研究。收集、分离、鉴定与保藏 的原虫涉及7 个目，8 个科，30 多个种，160 多个不同地区分离株，对虫种资源从分离技术、保藏方法、病原形 态学、致病性、生活史等普通生物学，到18S rRNA 的基因序列测定及某些基因克隆表达的分子生物学技术等全 方位的研究，初步建成了国内较大的原虫活虫种库。采用血液注射、媒介传播、单一虫株克隆、组织感染等方法 对原虫进行了有效分离，通过传统分类学和病原进化关系的研究，可对动物原虫进行正确的分类鉴定。 关键词：原生动物；种质资源库；收集；鉴定；18S rRNA 基因 中图分类号：Q959.11 文献标识码：A 文章编号：1000-3207(2008)增-0024-08 原生动物（Protozoa ）简称原虫，是最原始、 1 材料与方法 最简单、最低等的单细胞动物，是一个独立的动物 1.1 实验动物 6—12 月龄的犊牛及 3—4 月龄的 界门。目前与动物疾病有关的主要原虫有数十种， 羔羊均购于甘肃省定西县，实验小鼠来自本所实验 隶属于 5 门、5 纲、10 多个科，尤以孢子虫纲 动物场的清洁级小白鼠，试验用小鸡为刚孵出未落 (Sporozoasida)的种类最多，对畜禽的危害最大，其 盘的雏鸡。在试验开始前 30d，用于梨形虫分离和 中有一部分为人畜共患寄生虫[1,2] 。这些原虫是动物 传播试验的动物均被切除脾脏，并对动物进行病原 寄生虫病的主要病原，对畜牧业发展的危害非常严 学检查，只有血涂片检查无任何血液原虫感染及试 重，给国民经济和人民生活造成极大的威胁。兽医 验检测无相应病原的动物，才能用于本试验。 原虫的收集、分离、鉴定、保藏及资源库的建立， 1.2 媒介蜱 用于病原分离的媒介蜱采集于梨形 是开展寄生虫学与寄生虫病学研究的基础和前提， 虫病流行区；用于传播试验的媒介蜱为实验室多代 对病原学、免疫学和检测技术研究，疾病的诊断与 培育的清洁蜱。 普查，港口检疫与药物筛选，教学和生产用标准虫 1.3 病原样品 血液样品为采自疫区牛、羊或相应 种及标准阳性血清的制备与提供等具有重要意义。 易感动物的抗凝血液，冰盒内保藏或液氮储存，带 我所 20 多年