动物细胞融合与单克隆抗体二课时.pptVIP

复习题问 1、动物细胞融合的原理？ 2、诱导动物细胞融合的方法？ 3、动物细胞融合成功的标志？ 4、动物细胞融合最重要的应用是？ 问题： 体外培养的条件下，一个B淋巴细胞是不可能无限增值的，如何使单个B淋巴细胞增殖呢？有什么方法能使一个细胞同时具备产生抗体和无限增殖能力呢？ 阳性孔中的细胞还不能保证是来自单个细胞，挑选阳性孔的细胞继续进行有限稀释，一般需进行3～4次，直至确信每个孔中增殖的细胞为单克隆细胞。该过程即为杂交瘤细胞的克隆化培养。 能准确识别各种抗原物质的细微差异，并跟一定抗原发生特异性结合，具有准确、高效、简易、快速的优点。 2、科学家们用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交瘤细胞，经培养可产生大量克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是 A.经过免疫的T淋巴细胞 B.未经过免疫的T淋巴细胞 C.经过免疫的B淋巴细胞 D.未经过免疫的B淋巴细胞 4）、图中B为________过程，常用_________作为诱导剂，该细胞继承___________的遗传特性，既能__________,又能__________。 5）、C过程指细胞培养，该过程包括_____培养和_____培养两个阶段，其中_____代以内的的细胞属于细胞株。 细胞融合 灭活的病毒 双亲细胞 分泌抗体 无限增殖 原代 传代 50 15、下图是单克隆抗体制备流程阶段示意图： （1）_________ 技术是单克隆抗体技术的基础。 （2）根据培养基的用途分类，图中HAT培养基属于________培养基。 （3）单克隆抗体与常规的血清抗体相比，最大的优越性是_____________ ___。 动物细胞培养 选择 特异性强,灵敏度高 * 2.2.2 动物细胞融合与 单克隆抗体 第二课时 长期以来，为了获得抗体，采用的是把某种抗原反复注射到动物体内，然后从动物血清中分离出所需抗体的方法。用这种方法获得的抗体，不仅产量低，而且抗体的特异性差，纯度低，反应不够灵敏。人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个B细胞只分泌一种特异性抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个B细胞进行无性繁殖，即克隆。 1975年英国科学家米尔斯坦和柯勒的实验 杂交瘤技术 两人因此在1984年获诺贝尔奖 将能够产生特定抗体的B淋巴细胞和具有无限增殖能力的骨髓瘤细胞融合在一起，形成杂交瘤细胞。杂交瘤细胞既能在体外快速增殖，又能持续分泌特异性抗体。 二、单克隆抗体 由单个B淋巴细胞经过无性繁殖（克隆)形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。 1、概念 特异性强、灵敏度高,并且可以大量制备 2、优点 3、制备过程 体内培养 注射抗原 已免疫的B 淋巴细胞 骨髓瘤细胞 筛 选 杂交瘤细胞 能产生特定抗体的杂交瘤细胞 筛 选 体外培养 单克隆抗体 第一次筛选（选择培养基）： 杂交瘤细胞 第二次筛选（专一抗体阳性检验）： 能产生特异性抗体的杂交瘤细胞 4、两次筛选的目的 融合后的细胞经选择培养基培养后，能存活的细胞就是杂交瘤细胞。但这些杂交瘤细胞并非都是能分泌所需抗体的细胞，通常用“有限稀释法”来选择。将杂交瘤细胞稀释，用多孔细胞培养板培养，使每孔细胞不超过一个，通过培养让其增殖。然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体（常用酶联免疫吸附试验法），那些上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。 5、单克隆抗体的应用 （1）、作为诊断试剂 （2）、用于治疗疾病和运载药物 主要用于癌症治疗，可制成“生物导弹”，也有少量用于治疗其它疾病。 生物导弹：单克隆抗体 + 药物 （导向） （弹头） 动物细胞工程 植物细胞工程 植物组织培养 植物体细胞杂交 应用 动物细胞培养 核移植技术 动物细胞融合 单克隆抗体 细胞工程 2、B淋巴细胞具有产生单一抗体的能力，但不能在体外增殖；骨髓瘤细胞是一种癌细胞，它能在体外培养条件下无限增殖，但不能产生抗体。因此，把一种B淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合，产生杂交瘤细胞，它会兼有两个亲本细胞的特性──在体外培养条件下能不断增殖，同时能产生出某种特异性的抗体。 1、单克隆抗体是指 A.单个骨髓瘤细胞增殖产生的抗体 B.单个B淋巴细胞增殖产生的抗体 C.单个杂交瘤细胞增殖产生的高度单一的抗体 D.单个抗体通过克隆化，产生大量抗体 C C 3、单克隆抗体制备过程中杂交瘤细胞是 A.由小鼠能产生抗体的B淋巴细胞与肝细胞融合 B.由小鼠