骨髓间充质干细胞分离鉴定及在糖尿病大鼠肾脏保护中的机制研究.pdfVIP

康摇 岩等摇 骨髓间充质干细胞分离鉴定及在糖尿病大鼠肾脏保护中的机制研究摇 第5期 ·673 · doi:10.3969/ j.issn.1000鄄484X.2017.05.008 骨髓间充质干细胞分离鉴定及在糖尿病大鼠肾脏保护中的机制研究淤 康摇 岩摇 李志杰摇 王丽娜摇 郭玉卿摇 刘摇 璠摇 张摇 洁 (河北医科大学第一医院,石家庄 050031) 摇 摇 中图分类号摇 R392摇 摇 文献标志码摇 A摇 摇 文章编号摇 1000鄄484X(2017)05鄄0673鄄06 [摘摇 要]摇 目的:观察骨髓间充质干细胞分离、鉴定方法及在糖尿病大鼠肾脏保护中的机制。 方法:取大鼠31只,1只 大鼠采用贴壁培养法分离大鼠骨髓间充质干细胞,利用相差显微镜观察细胞形态,Real鄄time PCR检测培养细胞表面分子量。 30 只大鼠采用链脲佐菌素腹腔注射构建糖尿病大鼠模型。 根据处理方法不同分为对照组(n=15)和干细胞治疗组(n=15)。 对照组大鼠采用胰岛素联合普罗布考治疗,干细胞治疗组植入干细胞治疗,治疗前、后检测2组大鼠空腹血糖、24 h尿蛋白排 泄、肌酐清除率、肾重比体重;采用PAS染色观察2组肾组织情况;采用Western blot检测肾脏组织相关基因和蛋白水平。 结 果:原代骨髓间充质干细胞培养24 h后换液时可见细胞分布不均匀,在培养瓶呈分片聚集,形态不规则。 培养7 d后细胞集落 多,细胞规则,呈长梭形、椭圆形,折光性强,细胞间相互融合铺满瓶底;骨髓间充质干细胞传代培养后细胞形态均一,呈长梭 形,轮廓清除,折光性强,生长迅速,部分细胞呈漩涡状;Real鄄time PCR检测结果显示:SH2、CD44、CD31呈阳性表达,CD34 呈 阴性表达;观察组治疗后空腹血糖、24 h尿蛋白排泄、肌酐清除率、肾重比体重,显著低于对照组(P0郾05);干细胞治疗组大鼠 肾脏组织PAS染色结果显示:肾小球结构清晰,形态规则,肾小球内细胞排列规则,基底膜和包曼氏囊清晰。 对照组大鼠肾小 球体积增大,系膜区增宽,基质明显增多;干细胞治疗组治疗后Bcl鄄2蛋白水平得到显著提高,Bax 和Caspase鄄3蛋白水平得到 显著下降。 对照组Bcl鄄2蛋白水平得到显著降低,Bax和Caspase鄄3蛋白水平得到提高(P0郾05)。 2组治疗前氧化应激ROS、 MDA、SOD指标差异无统计学意义(P0郾05);干细胞治疗组治疗后氧化应激 ROS、MDA、SOD指标,低于对照组(P0郾05)。 结论:利用贴壁培养法能分离大鼠骨髓间充质干细胞并利用绿色荧光蛋白进行体外标记,植入骨髓间充质干细胞能保护机体 肾脏,抑制糖尿病肾脏的氧化应激反应。 [关键词]摇 糖尿病肾病;骨髓间充质干细胞;肾脏保护;相链脲佐菌素;PAS染色;Real鄄time PCR法;Western blot Mesenchymal stem cell isolation,identification and protection mechanism in kidney of diabetic rats KANG Yan,LI Zhi鄄Jie,WANG Li鄄Na,GUO Yu鄄Qing,LIU Pan,ZHANG Jie郾The First Affiliated Hospitol of Hebei Medical University,Shijianzhuang 05031,China [Abstract]摇 Objective:To observe the bone marrow mesenchymal stem cell isolation,identification methods and protection mechanisms in the kidney of diabetic rats郾Methods: Thirty鄄one rats were used to isolate bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) by adherent culture method郾Cell morphology was observed by phase contrast microscope郾The surface molecular weight of cultured cellswasdetectedby Real鄄timePCR郾30 ratswereinducedby intraperitonealinjectionof str