草鱼酸性磷酸酯酶的性质及金属离子对其活性的影响-中国水产科学.pdfVIP

第17卷第5期 中国水产科学 Vol.17 No.5 2 0 1 0 年 9 月 Journal of Fishery Sciences of China September 2010 草鱼酸性磷酸酯酶的性质及金属离子对其活性的影响 杨立红，肖波，王晓洁，侯月利，王佳，孙静 （鲁东大学 生命科学学院，山东 烟台 264025） 摘要：以草鱼肝脏为材料提取一种酸性磷酸酯酶（ACPase，EC.），进一步用（NH ）SO 沉淀分离，Sephadex G-200 4 2 4 柱纯化，经聚丙烯酰胺凝胶电泳纯度鉴定呈现单一酶蛋白带，该酶紫外吸收峰为240 nm和280 nm，等电点为4.8，相对分 子质量为100 046.1。该酶水解对硝基苯磷酸二钠（pNPP）的最适pH值为4.4，最适温度为45 ℃，并有热激活现象，热激 活温度为60 ℃。耐热实验表明，该酶在最适温度下耐热时间为33 min，最适温度下20 min时表现出最大活性。在60 ℃ 下耐热时间为25 min，15 min时表现最大活性。酶促反应初速度为0.047 5 μmol/min，最大反应速度为0.153 μmol/min。 -3 + + + 米氏常数 Km 值为3.56 ×10 mol/L。金属离子对酶活性影响的研究结果表明，K 对酶有激活作用，Li 、Na 对酶的活性 2+ 2+ 2+ 2+ 2+ 2+ 2+ 没有明显影响；碱土金属离子Mg 、Ca 和Ba 对酶有激活作用，其激活程度由大到小依次为：Ba 、Mg 、Ca ； Mn 对 2+ 2+ 2+ 2+ 2+ + 2+ 2+ 酶有激活作用，Zn 、Cu 、Co 则有抑制作用；重金属离子Hg 、Pb 、Ag 和Cd 对酶有抑制作用，其中Hg 的抑制效 应最强。Mg2+和 Cu2+ 的作用机制研究结果表明，Mg2+对酶具有混合型激活作用，Cu2+对酶具有竞争性抑制作用。［中 国水产科学，2010，17（5）：969-976］ 关键词：草鱼；酸性磷酸酯酶； 金属离子；活性 中图分类号：Q556；S917　　　 　文献标识码：A　　　 　　文章编号：1005-8737-（2010）05-0969-08 草鱼（ ）是中国重要淡水经   材料与方法 Ctenopharyngodon idellus 1 济鱼类。养殖水环境与鱼体的健康息息相关，水环 1.1 实验材料、试剂和仪器 境的污染会导致草鱼生长不良。其原因之一是某 草 鱼（ ）成 鱼，体 质 量 Ctenopharyngodon idellus 些金属离子尤其是重金属离子，对鱼体内的酶产生 1 500 ～2 000 g。对硝基苯磷酸二钠（pNPP）购于Sigma 抑制作用。其中，酸性磷酸酯酶（ACPase）在鱼体生 公司，葡聚糖凝胶（SephadexG-200）为P