短发夹高迁移率族蛋白b1真核细胞表达载体通过hoxa9下调人脐.pdfVIP

· 662 · 中华危重病急救医学 2015 年8 月第27 卷第8 期　Chin Crit Care Med，August 2015 ，Vol.27，No.8 · 论著· 短发夹高迁移率族蛋白B1 真核细胞表达载体 通过HOXA9 下调人脐静脉血管内皮细胞 表达E- 选择素 【摘要】 目的 探讨高迁移率族蛋白B1 （HMGB1 ）基因表达对人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC ）激活 表达E- 选择素的分子机制。方法 将同源盒转录因子（HOXA9 ）小干扰RNA （siRNA ）短序列转染至对数生 长期的HUVEC ，采用实时荧光定量聚合酶链反应（实时qPCR ）和蛋白质免疫印迹试验（Western Blot ）检测其 对HOXA9 mRNA 和蛋白表达的影响；另设空白对照组和无意序列nonsilence 阴性对照组。取已经稳定转染 pRNA-u6.1/Neo-HMGB1 shRNA 质粒的HUVEC （低表达HMGB1 的HUVEC ），采用实时qPCR 法检测HOXA9 和E 选择素的mRNA 表达；另设nonsilence 转染组作为阴性对照。将HOXA9 siRNA 转染至低表达HMGB1 的 HUVEC 中作为共同转染组，采用实时qPCR 法检测E- 选择素的mRNA 表达；以HMGB1 shRNA 组和HOXA9 nonsilence 组作为对照。结果 ① 空白对照组HOXA9 mRNA （2- ΔΔCT ）和蛋白（积分A 值）表达分别为1.094 ± 0.115 和1.031 ±0.060 。与无意序列nonsilence 转染组比较， HOXA9 siRNA 转染组可显著降低HUVEC 细胞中 HOXA9 的mRNA 和蛋白表达〔HOXA9 mRNA （2- ΔΔCT ）：0.257 ±0.030 比1.035 ±0.091 ，t ＝14.010，P ＝0.002 ； HOXA9 蛋白（积分A 值）：0.278 ±0.042 比0.975 ±0.014 ，t ＝27.310 ，P ＝0.002 〕。② 与nonsilence 转染组比较， HMGB1 shRNA 转染上调了HUVEC 中HOXA9 mRNA （2- ΔΔCT ）表达（2.519 ±0.278 比0.856 ±0.063 ，t ＝10.100， P ＝0.001 ），同时下调了E- 选择素mRNA （2- ΔΔCT ）表达（0.311 ±0.046 比1.080 ±0.201 ， t ＝7.415 ，P ＝0.000 ）。 ③ 与HOXA9 nonsilence 组及HMGB1 shRNA 组比较，HMGB1 shRNA 和HOXA9 siRNA 共同转染后HUVEC 细胞中E- 选择素 mRNA （2- ΔΔCT ）表达明显升高（3.445 ±0.428 比1.085 ±0.212 、 1.004 ±0.104 ，t ＝8.507 ， 1 t2 ＝9.603 ，均P ＜0.001 ）。结论 HMGB1 在HUVEC 细胞核内可能通过HOXA9 调节E- 选择素的表达。 【关键词】 脓毒症； 血管内皮细胞； 高迁移率族蛋白； 同源盒蛋白基因； E- 选择素； 转染； 真核 细胞表达载体 shRNAs targeting high mobility group box-1 lead to inhibition of E-selectin expression via homeobox A9 in human umbilical vein endothelial cells Zhang Xiaojuan*, Jiao Lili, Luan Zhenggang, Ma Xiaochun. *Department of Critical Care Medicine, the First Hospital, China Medical