实验四、酵母菌的形态观察与微生物大小的测定、显微镜直接计数法.pptVIP

实验四 酵母菌的形态观察及大小、数量测定 （一）酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别 目的要求 观察酵母菌的形态及出芽生殖方式。 学习区分酵母菌死活细胞的实验方法。 基本原理 美蓝是一种无毒性染料.氧化型呈现蓝色,还原型呈现无色.用美蓝对酵母的活细胞进行染色,代谢活力强的细胞具有较强的还原能力,能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型.因此,具有还原能力的酵母活细胞为无色,死细胞或代谢能力弱的衰老细胞为蓝色. 实验器材 菌种 酒曲中分离纯化的酵母 溶液或试剂 0.1%吕氏碱性美蓝染色液 仪器或其他用具 显微镜，盖玻片，载玻片，滤纸，擦镜纸。 实验步骤 制片 在载玻片中央加一滴0.1%美蓝→取菌少许→混匀→盖上盖玻片→静置3min、0.5h 观察 用高倍镜观察酵母的形态和出芽生殖 根据颜色鉴别死活细胞 活细胞：无色；死细胞：蓝色 实验结果 绘图说明你所观察到的酵母菌的形态特征及出芽生殖方式。 记录染色时间对酵母菌死活细胞数量的影响。 思考题 吕氏碱性美蓝染色液作用时间的不同，对酵母菌死细胞数量有何影响？试分析其原因。 你认为在显微镜下，细菌、放线菌、酵母菌和霉菌的主要区别是什么？ (二）、微生物大小的测定 目的要求 1.学习并掌握用测微尺测定微生物大小的方法。 2.增强微生物细胞大小的感性认识。 实验原理 镜台测微尺为中央部分刻有精确等分线的载玻片，将1mm等分100格，每格长0.01mm。只用于校正目镜测微尺。 目镜测微尺是可放入目镜内的圆形小玻片，精确等分50小格或100小格。由于不同显微镜或不同目镜和物镜组合放大倍数不同，目镜测微尺每小格所代表的实际长度也不一样。因此，测量前需先用镜台测微尺进行校正。 球菌以直径表示大小；杆菌用宽×长表示。 实验器材 菌种：啤酒酵母 仪器：显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺 实验步骤 安装目镜测微尺 校正目镜测微尺 将镜台测微尺刻度面朝上放在显微镜载物台上。 分别在低、高倍镜、油镜下用镜台测微尺校正目镜测微尺 计算 镜台测微尺：将1mm等分为100小格，每小格长0.01mm（即10μm）。 目镜测微尺每格长度（μm）=（两重合线间镜台测微尺格数×10）/两重合线间目镜测微尺格数 菌体大小测定 取下镜台测微尺，换上酵母菌水浸片，在高倍镜下测定酵母菌的长和宽。 选择有代表性的10个细胞进行测定，取平均值。 实验结果记录（书P50） 1）将目镜测微尺校正结果填入下表 接目镜放大倍数：—— 2）将啤酒酵母测定结果填入下表 目的要求 1.明确血细胞球计数板计数的原理。 2.掌握使用血细胞计数板进行微生物计数的方法。 基本原理 血球计数板的构造 血球计数板是一块特制的载玻片，其上由4条槽构成3个平台；中间较宽的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各有一个方格网。每个方格网共分9个大方格，中间的大方格即为计数室。 计数室的刻度有两种规格：一种是一个大方格分成16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格；另一种是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格。但无论哪种规格，每个大方格都由400个小方格组成。 每个大方格边长为1mm，则每个大方格的面积为1mm2，盖上盖玻片后，盖玻片与载玻片之间的高度为0.1mm，所以计数室的容积为0.1mm3。 实验器材 菌种：啤酒酵母 仪器：显微镜、血球计数板 注意事项 取样时先要摇匀菌液； 加样时计数室不可有气泡； 一般样品稀释度要求每小格内约有5-10个菌体为宜； 每个计数室选5个中格（4个角和中央）计数； 位于格线上的菌体一般数上不数下，数右不数左； 若芽体大小达到母细胞的一半，则作为两个菌体计数。 血球计数板使用完毕，用水冲洗干净，切勿用硬物洗刷，以免损坏网格刻度；洗净后自行晾干或吹风机吹干。 实验结果（书P５５） 测定你所制备的样品的含菌量。 A表示五个中方格中的总菌数；B表示菌液稀释倍数 油 镜 高倍镜 低倍镜 目镜测微尺每格代表的长度 /um 镜台测微尺格数 目镜测微尺格数 接物镜倍数 接物镜 １０ 长度/um 目镜测微尺格数 宽度/um 目镜测微尺格数 平均值 9 8 7 6 5 4 3 2 1 菌体大小/um 长 宽 目镜测微尺每格代表的长度/um 测定次数 （三）酵母菌的显微镜直接计数 制 备 适 当 浓 度 的 菌 悬 液 取 洁 净 的 血 球 计 数 板 盖 上 盖 玻 片 静 置 5 分 钟 用 高 倍 镜 计 数 加 样 品 设5个中方格的总菌数为A，菌液稀释倍数为B 计数板为25个中方格(本次试验) ： 1ml菌液的总菌数=A/5×25×104×B 计数板为16个中方格： 1m