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决明子有效成分黄酮类化合物的提取 生科院093班 谈洋成一、摘要： 决明子是一种常用中药，富含黄酮，蒽醌和多糖，具有广泛的药理活性。现代药理学研究又表明，决明子具有降血压、降血脂，保肝及抑菌等活性，被应用于多种降脂减肥的成方制剂中。同时，决明子又可作食用中药，是保健饮料的良好原料。 实验过程中测定了决明子中黄酮类化合物的含量，采用乙醇回流水浴提取黄酮，对比研究提取时间、乙醇浓度、浸出温度和料液比等因素对提取效果的影响,再进行正交实验优化工艺条件。含量测定应用紫外—可见分光光度法进行测定，并使用NaNO2-Al(NO3)3-NaOH显色体系。 实验结果表明乙醇提取法效果最佳。在最佳提取条件75％乙醇为提取剂，80℃下提取，提取时间3.5h，料液比1:30时。以芦丁为标准物质，绘制的标准标准曲线其回归方程为C=96.838A-2.8675，相关系数R2=0.9951。又测得提取液吸光度为0.428，黄酮浓度为37.0μm/mL，提取率为88.61%。 二、关键词： 决明子，黄酮类化合物，乙醇，提取工艺。 三、材料和方法： 1、实验仪器 名称 型号 生产厂家 循环水式多用真空泵 SHB—Ⅲ 郑州长城科工贸有限公司 电子恒温不锈钢水浴锅 HHS—2S 上海市南阳仪器有限公司 可见分光光度计 722N 上海精科电子有限公司 调温电加热套 DZHW 河北省黄骅市中兴仪器有限公司 电子天平 AW220 慈溪市天东衡器厂 大功率粉碎机 QE—100 武汉县工具有限公司 索氏提取器 - 天津北辰区光明仪器厂 蒸馏装置 M22型中量 天津玻璃仪器厂 电热干燥箱 202—3 北京金北德工贸有限公司 实验药品 选用决明子在药房购得，产地为广西省。 名称 分子式 纯度 生产厂家 芦丁标准物质 C27H30O16 A.R 西安旭煌生物技术有限公司 95%乙醇 CH3CH2OH A.R 天津永晟精细化工有限公司 无水甲醇 CH3OH A.R 天津光复精细化工研究所 丙酮 CH3COCH A.R 天津风船化学试剂科技有限公司 石油醚 - A.R 天津永晟精细化工有限公司 亚硝酸钠 NaNO2 A.R 天津永晟精细化工有限公司 硝酸铝 Al2(NO3)3·9H2O A.R 天津永晟精细化工有限公司 氢氧化钠 NaOH A.R 天津永晟精细化工有限公司。 3、实验流程及装置图 黄酮提取实验流程 实验所用仪器装置见图 5、实验方案 5.1标准溶液的配制和标准曲线制作 将芦丁于120℃下干燥至恒重，准确称取芦丁标准样品0.0200g，用30％乙醇溶解，定溶于100mL，得浓度为0.200mg/mL芦丁标准液。准确吸取芦丁标准液0mL、0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL、3.0mL于10mL容量瓶中，加入5%NaNO2液0.3mL，摇匀，放置6min后加入10%Al(N03)3溶液0.3mL，摇匀，放置6min后加入4%NaOH溶液4.0mL，再用30%乙醇定容，摇匀，以30%乙醇为空白参比，l0min后用lcm比色皿于510nm测定吸光度A，得到芦丁标样含量Y(μg/mL)与吸光度A间的关系，画出标准曲线[]。 5.2决明子中黄酮平均含量的提取及测定 决明子中总黄酮平均含量的测定。分3次分别准确称取3.0决明子粉末，用滤纸包住并用棉线捆好，置于索氏提取器中，用100mL甲醇体积浓度75％，80℃水浴加热回流，当索氏提取器中的溶液由黄色接近无色时，取出用滤纸包住的决明子粉末，蒸馏回收甲醇至近干，加水约80mL溶解，加入20mL石油醚脱色2次，弃去醚层。加水于100mL容量瓶中定容，作为待测液[17]。取待测液10mL于50mL容量瓶中，用30％乙醇定容，取2.0mL于10mL容量瓶中，以下按照测定芦丁标准液吸光度的方法测定吸光度A。重复3次，结果取平均值[]。从决明子中提取的黄酮含量可按下列公式计算： M(%)=[Y×(100/10)×(50/2)×10×10-6×100]/w 式中：100/10 和50/2—稀释倍数；w—决明子重(g)。提取率(%)=(提取黄酮含量/决明子中总黄酮的平均含量)×100[18]。 5.3决明子中总黄酮的提取及测定 准确称取3.0g决明子粉末置于磨口三颈烧瓶中，按照设计的配方加入一定量的提取剂，在一定温度下回流提取一定时间，趁热减压抽滤，滤渣加适量水洗涤、过滤．合并清液后得提取液，再蒸馏，回收溶剂至近干，再按照2中的步骤配置待测液，以下按照测定芦丁标准液吸光度的方法测定吸光度A，计算黄酮提取率[]。 5.4提取溶剂的选择 分别用沸水、碱性水溶液(pH值9.0)、75％乙醇溶液、7