一种新的等温扩增技术检测阪崎肠杆菌.pdfVIP

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※分析检测 187 良品科学 2013,V01.34,No.02 一种新的等温扩增技术检测阪崎肠杆菌 张霞1”,吴冬雪2,曲鹏2,刘红梅2,张宏伟1’2,高旗利2,郑文杰2,王硕1,木 (1.天津科技大学食品工程与生物技术学院,天津 300457:2.天津出入境检验检疫局,天津 300457) 摘要:目的:建立一种新型阪崎肠杆菌快速筛选检测方法一交叉引物恒温扩增结合免疫金标检测方法。方法: 针对阪崎肠杆菌16S.23SrDNA间区序列设计特异性引物及探针,建立交叉引物等温扩增法,利用免疫金标试纸条 对结果进行检测。用18株阪崎肠杆菌及其他36株近源菌进行特异性试验:通过定量DNA、纯菌液计数、添加干扰 菌检测进行灵敏度验证。结果:建立方法具有很好的特异性;增菌液检测灵敏度为101CFU/mL,DNA检测灵敏度 为100fg/test。结论:建立的交叉引物恒温扩增结合免疫金标检测方法特异性好、灵敏度高,不需要复杂仪器,对口 岸快速筛查、基层或偏远经济不发达地区顺利开展检测具有实际意义。 关键词:阪崎肠杆菌;等温扩增技术 ANewIsothermal fortheDetectionofEnterobactersakazakii AmplificationAssay ZHANG Ydal。,WU Dong-xue2,QUPen92,LIUHong-mei2,ZHANGHong-weiu,GAOQi-li2,ZHENG 300457,China; (1.CollegeofFoodEngineeringandBiotechnology,TianjinUniversityofScienceandTechnology,Tianjin and 2.TianjinEntry—ExitInspectionQuarantine 300457,China) Bureau,Tianjin establishanew methodforthedemcfionofEsakazakii Abstract:Objective:Torapidscreening byusingcross-primer combinedwith thebasisof of16S-23SrDNA amplification immuno·blotting analysis analysis.Methods:Onsequence internaltranscribedin and were and for designed cross·primer spacerE.sakazakii.specificprimersprobes developed isothermal andallimmunecolloidaltest wasusedtotestthe totalofl8 amplification gold strip amplificationproducts.A

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