PCR-RFLP技术用于脓肿分枝杆菌群鉴定的初步研究.pdfVIP

PCR-RFLP技术用于脓肿分枝杆菌群 鉴定的初步研究 李艳冰 张媛媛 李晓亮 赵秀芹 万康林 刘文恩 [摘要] 目的 探讨PCR-RFLP分子鉴定技术对脓肿分枝杆菌群鉴定的应用价值。方法 收 集2009-2010年在福建省肺科医院、北京市朝阳区疾病预防控制中心、北京解放军总医院抗酸染色 阳性菌株46株。根据2004年分枝杆菌检验手册临床检验常分离菌鉴定程序，用DNA直接测序方法 为对照，以hsp65(441bp)和rpoB(380bp)基因的特异片段为分子标识，采用PCR-RFLP对脓肿分枝 杆菌群临床分离菌株进行菌种鉴定。结果 接种L-J、PNB和TCH培养基，鉴定为结核分枝杆菌 30株，非结核分枝杆菌16株。其中10株非结核分枝杆菌的培养特性和主要生化反应同脓肿分枝杆 菌(ATCC19977)结果一致。经hsp65PCR-RFLP鉴定，9株菌株的指纹图谱为235和200bp(BstEⅡ)/ 145、70、60、55、50和40bp（HaeⅢ）,1株菌株的指纹图谱为235和200bp(BstEⅡ)/200、70、60和 50bp(HaeⅢ)。经rpoBPCR-RFLP鉴定，10株临床菌株的指纹图谱是105、95和80bp（MspⅠ）/130、 100bp和90bp(HaeⅢ)。DNA测序分析，9株分离株与脓肿分枝杆菌群脓肿亚种hsp65和rpoB基因 序列匹配度均为100％；1株分离株与脓肿分枝杆菌群马赛分枝杆菌亚种hsp65和rpoB基因序列匹配 度均为100％。结论 PCR-RFLP是一种快速、有效鉴定脓肿分枝杆菌的方法，且hsp65PCR-RFLP的 鉴定效果优于rpoBPCR-RFLP。 [关键词]分枝杆菌属；细菌蛋白质类；聚合酶链反应；多态性，限制性片段长度；细菌 分型技术 PreliminarystudyontheidentificationofMycobacteriumabscessusgroupwithPCR-RFLP LIYan-bing ZHANGYuan-yuanLIXiao-liangZHAOXiu-qin WANKang-linLIUWen-enClinicalLaboratory, XiangyaHospitalofCentralSouthUniversity,Changsha410008,China [Abstract] Objective ToinvestigateandevaluatethePCR-RFLPmethodforidentificationof Mycobacteriumabscessus(M.abscessus)group.Methods 46clinicalacid-fastbacilli(AFB)isolatesfrom PulmonaryHospitalofFujianProvince,CenterforDiseaseControlandPreventionofZhaoyangDistrictin BeijingandBeijingPeopleLiberationArmyGeneralHospitalwerecollectedin2009-2010andidentifiedby traditionalbacteriologicalcharacteristicsaccordingtoclinicallaboratoryhandbookofmycobacteria(2004). ThePCR-RFLPmethodwasusedforspeciesidentificationofM.abscessusgroupusinghsp65(441bp)or rpoB(380bp)genefragmentasspecifictarget,whilethedirectDNAsequencingwasperformedasacontrol method.Results Of46AFBisolates,30strainswereidentifiedasMycobacteriumtuberculosisbyits traditionalbacteriologicalcharacteristicsand16strainswereidentifiedasnon-tuberculosismycobacterium (NTM).10strainsoftheNTMstrainshadidenticalbacteriologicalcharacteristicswiththereferencestrain 10.3760/cma.j.issn.1009-9158.2011.11.013 基金项目：