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sRNA(istR)在肠炎沙门氏菌抗活性氮氧中的作用分析
微生物学通报 AUG 20, 2011, 38(8): 1241−1248 Microbiology China © 2011 by Institute of Microbiology, CAS tongbao@ 研究报告 sRNA (istR)在肠炎沙门氏菌抗活性氮氧中的 作用分析 * * 曹学松 蒋惠源 曹鸣辉 顾宏伟 曾科 (南京大学 生命科学学院 医药生物技术国家重点实验室 江苏 南京 210093) 摘 要: sRNA (Small non-coding RNA, sRNA)为新近发现的基因表达调控分子, 转录后水平调控 靶基因表达, 在细菌毒力、应激及对外界环境感应方面起调控作用。沙门氏菌是一种重要的人畜 共患病病原菌, 可引起人类食物中毒、败血症及伤寒等。以肠炎型沙门氏菌为模型, 研究 sRNA (istR)在肠炎沙门氏菌抗活性氮氧中的作用, 为沙门氏菌的防治提供新方向。参考已报道的沙门氏 菌全基因组及istR 序列, 设计引物, PCR 扩增istR 突变用基因片段, 运用Red 同源重组系统对肠炎 沙门氏菌(SE2472)的istR 基因进行定点敲除, 构建敲除菌株(SE2472△istR), 比较野生株和敲除株 对活性氮氧的敏感性; 构建回复表达质粒 pHDB3-istR, 将其转入 istR 敲除株构建回复株 SE2472△istR-comp, 以回复表达istR, 分析 istR 表达对沙门氏菌 istR 敲除株抵抗活性氮氧的回复 作用。活性氮抑菌结果表明, SE2472 在pH 5.0 、NaNO2 浓度为20 mmol/L 的LB 液体培养基中培 养3 h, 存活率为20.40%; 培养6 h, 存活率降至0.05% 。同等培养条件下, SE2472△istR 的存活率 分别为0.70%和0, SE2472△istR-comp 生长情况与SE2472 类似, 存活率分别为21.40%和0.08% 。 同时用 H2O2 分析 istR 在沙门氏菌抗活性氧中的作用, 活性氧抑菌结果表明, SE2472 和 SE2472△istR 两者对H2O2 的抑菌作用无明显差异。综合上述结果, 推测istR 在沙门氏菌抗活性氮 中起着调控作用, 在抗活性氧作用中没有调控作用。 关键词: 沙门氏菌, sRNA, 基因敲除, 活性氧, 活性氮 Analysis of regulation role of sRNA (istR) in Salmonella resistant to reactive nitrogen and oxygen intermediates * * CAO Xue-Song JIANG Hui-Yuan CAO Ming-Hui GU Hong-Wei ZENG Ke (State Key Laboratory of Pharmaceutical Biotechnology, School of Life Science, Nanjing Univers
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